苜蓿Ⅰ類chi、酸性glu的克隆和農桿菌介導的轉化過程的超微結構研究.pdf

1、蘭州大學碩士學位論文苜蓿Ⅰ類chi、酸性glu的克隆和農桿菌介導的轉化過程的超微結構研究姓名：戴怡齡申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：安黎哲20050601蘭州大學碩十學位論文4、采用三親交配法構建含pBll21一chiAl2的農桿菌工程菌株，葉盤法轉化煙草外植體，得到58棵抗性植株，經PCR檢測初步確定其中的39棵為陽性轉皋因植株，進一步利用SDS—PAGE電泳和減色法測定葉片中的幾丁質酶活，了解導入的Chi基因在轉基因煙草中的

2、組成型表達情況，發(fā)現部分轉基因植株葉片的電泳條帶中出現35kDa大小的特異帶，可見轉基因植株相對于非轉基因植株其Chi表達程度和表達量都有明顯提高，顯示chiAl2在轉基因煙草中得到了活性表達。，5、建立辣椒遺傳轉化Km‘芽離體再生體系。組織培養(yǎng)發(fā)現誘芽培養(yǎng)基為MS6一BA40mg／INAA05mg／IAgN032mg／1時子葉外植體的出芽率最高，因此選用MS6一BA40mg／INAA05mg／1AgN032mg／lKm50m鯽為辣椒遺

3、傳轉化的抗性芽分化培養(yǎng)基。6、對農桿菌轉染辣椒共培養(yǎng)2d時和抗性篩選分化5d時的材料，經常規(guī)方法制片和電子染色后，用TEM觀察農桿菌細胞和予葉外植體細胞的超微結構變化，結果顯示：T菌毛在多型態(tài)菌體內裝配，具有雙層膜包繞的球形頭部，膜上直徑32～45rim的電子深染顆粒按79～87am的間距排列在兩層膜上；膜包繞的球形頭部內可見電子染色的細顆粒和細絲狀結構。B菌毛具管狀的尾結構，在T菌毛脫離菌體前，尾結構的膜管上也可見有規(guī)律排列的電子深染