ns7對(duì)ALS-SOD1G93A小鼠運(yùn)動(dòng)能力及早期脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的影響.pdf

1、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(Amyotrophic lateral sclerosis，ALS)是一種致命的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，屬于神經(jīng)退行性疾病的一種。病人一般在50-65歲之間發(fā)病，特點(diǎn)是漸進(jìn)性的上下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元選擇性死亡。該病可分為散發(fā)性和家族性，前者約占90-95％，后者約為5％-10％。兩種ALS病癥相似，都是肌肉無(wú)力、抽搐、痙攣，并導(dǎo)致肌肉損傷，最終病人因肌肉萎縮造成呼吸和吞咽困難而死亡。目前只有利魯唑是FDA授權(quán)的唯一治療藥物，但治

2、療效果并不理想。ALS是一類(lèi)涉及多系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，其發(fā)病機(jī)制與多種因素有關(guān)。目前認(rèn)為氧化應(yīng)激是其中重要的誘發(fā)因素。早期的研究就發(fā)現(xiàn)，在病理變化的神經(jīng)組織中有大量氧化損傷的DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。臨床病理檢查中，在病人的脊髓和皮層中檢測(cè)到羰基化蛋白質(zhì)和硝基酪氨酸水平增加，在神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了脂質(zhì)過(guò)氧化的現(xiàn)象。在A(yíng)LS-SOD1G93A動(dòng)物模型的研究中也發(fā)現(xiàn)，隨著病情發(fā)展自由基含量越來(lái)越高。針對(duì)這一因素，在治療A

3、LS的研究中用一些抗氧化劑來(lái)清除體內(nèi)過(guò)多的自由基，發(fā)現(xiàn)確實(shí)能抑制神經(jīng)元變性死亡、推遲發(fā)病時(shí)間、延長(zhǎng)動(dòng)物壽命。所以，抗氧化劑可能對(duì)緩解ALS的病情具有一定效果，在此方面的深入研究可為研制治療ALS的藥物提供新的選擇，具有重要的理論和實(shí)際意義。異牛桿菌素(Iso-suillin，ns7)(3，6-二羥基-((2E，6E，10E)-3，7，11，15-六甲基十六碳-2，6，10，14-四烯）苯乙酯），屬于聚異戊二烯酚類(lèi)化合物，是河北師范大學(xué)生

4、命科學(xué)學(xué)院王立安教授領(lǐng)導(dǎo)的研究小組從褐環(huán)粘蓋牛肝菌中分離得到了單一成分，屬于奇果菌素的衍生物。近年來(lái)的研究表明，ns7具有非常強(qiáng)的抗氧化活性和抗腫瘤能力，體外清除DPPH自由基的能力明顯高于Vc，體內(nèi)能明顯降低衰老小鼠血清和肝臟中丙二醛(MDA)含量。但是ns7是否能通過(guò)較強(qiáng)抗氧化活性而起到神經(jīng)保護(hù)作用還未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬以C57BL/6為背景的ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對(duì)象，將動(dòng)物分為空白對(duì)照組（同窩野生型）、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組

5、和實(shí)驗(yàn)組;用香油作為溶劑溶解ns7;在受試動(dòng)物出生后第40-90天，分別胃內(nèi)給予香油(空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，15ml/kg)以及香油溶解的ns7(實(shí)驗(yàn)組，劑量為50 mg/kg);通過(guò)轉(zhuǎn)棒、懸掛等方法檢測(cè)動(dòng)物的骨骼肌收縮能力、整體協(xié)調(diào)能力和平衡能力;以免疫組化、透射電鏡技術(shù)觀(guān)察脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)變化;用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)脊髓前角中HSP70、Caspase3、Bax等與氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡密切相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。通過(guò)對(duì)上述檢測(cè)數(shù)

6、據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，探究強(qiáng)抗氧化劑ns7是否具有保護(hù)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、延緩ALS病理進(jìn)程的作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴從受試小鼠出生后的第21周開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)組小鼠轉(zhuǎn)棒掉落的潛伏期就極顯著地長(zhǎng)于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P＜0.01)，且潛伏期為0的時(shí)間要比實(shí)驗(yàn)對(duì)照組晚3周;而在21周之后，空白對(duì)照組小鼠轉(zhuǎn)棒的潛伏期均顯著長(zhǎng)于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組以及實(shí)驗(yàn)組，且在測(cè)試期間未發(fā)生變化。⑵實(shí)驗(yàn)組小鼠的懸掛潛伏期的縮短從出生后第20周開(kāi)始，較比實(shí)驗(yàn)對(duì)照小鼠延遲了2周，且在

7、出生后第25周時(shí)尚可平均懸掛6s;在完全喪失懸掛能力的時(shí)間上，實(shí)驗(yàn)組比實(shí)驗(yàn)對(duì)照組延遲了3周，且始終極顯著地長(zhǎng)于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P＜0.01);空白對(duì)照組的潛伏期均顯著長(zhǎng)于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(P＜0.01)，在測(cè)試期間未發(fā)生變化。⑶實(shí)驗(yàn)對(duì)照組以及實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重從出生后第21周開(kāi)始就極顯著地低于空白對(duì)照組(P＜0.01)，兩組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。但從平均值上看，實(shí)驗(yàn)組體重減輕的速度要慢于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。⑷實(shí)驗(yàn)組小鼠的平均壽命為169天

8、，而實(shí)驗(yàn)對(duì)照組小鼠的壽命為158天，二者有顯著性差異(P＜0.05)?？瞻讓?duì)照組小鼠在30周時(shí)無(wú)一例死亡。⑸對(duì)出生后90天的受試動(dòng)物的頸髓和腰髓兩個(gè)階段的ChAT陽(yáng)性細(xì)胞的計(jì)數(shù)顯示，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組以及實(shí)驗(yàn)組小鼠的頸髓前角ChAT陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量要及顯著地低于空白對(duì)照組（P＜0.01），但兩組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。腰髓情況與頸髓相似。⑹對(duì)出生后90天受試動(dòng)物的頸髓和腰髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元透射電鏡觀(guān)察的結(jié)果顯示，空白對(duì)照組小鼠的頸髓和腰