ING4基因重組表達(dá)及抗腫瘤效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：先從小鼠肝組織中克隆ING4基因并構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.0-ING4，研究ING4對(duì)人肝癌SMMC7721細(xì)胞、人宮頸癌Hela細(xì)胞、人胃癌SGC7901細(xì)胞的作用；再構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-21a(+)-ING4并表達(dá)純化和制備多克隆抗體。 　　方法：采用RT-PCR技術(shù)從小鼠肝組織中克隆ING4基因，將其構(gòu)建至pUCm-T載體上，經(jīng)測(cè)序鑒定正確后，再構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-21a(一)-ING4和pcDNA3.0-I

2、NG4，采用PCR、雙酶切和基因測(cè)序鑒定。(1)利用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine分別將pcDNA3.0-ING4轉(zhuǎn)入COS-7細(xì)胞、人肝癌SMMC7721細(xì)胞、人宮頸癌Hela細(xì)胞、人胃癌SGC7901細(xì)胞。然后分別用RT-PCR、流式細(xì)胞儀、激光掃描共聚焦顯微鏡及Hoechst33258核染色等方法鑒定ING4基因的表達(dá)和研究其對(duì)幾種腫瘤細(xì)胞的抑制作用，同時(shí)還將ING4和IL-24對(duì)SMMC7721細(xì)胞的作用進(jìn)行比較。(2)