胍變?nèi)芫冈谑杷V表面折疊焓變的微量熱研究.pdf

1、本研究利用雙光束紫外分光光度計及圓二色CD光譜儀，對不同濃度鹽酸胍變性的溶菌酶水溶液進(jìn)行掃描測定，以研究變性程度不同時，溶菌酶的二級和三級結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著鹽酸胍濃度從0.4增加到2.6mol/L(蛋白濃度為0.4mg/mL)，溶菌酶的變性程度也不斷加強，逐漸失去其二級和三級結(jié)構(gòu)。但又發(fā)現(xiàn)溶菌酶均未被完全變性，仍不同程度保留著二級和三級結(jié)構(gòu)。25±0.001℃和35±0.001℃時，不同鹽酸胍(GuHCl)濃度變性的溶菌酶在高效液

2、相色譜疏水固體(端基PEG-600)表面的置換吸附的總焓變(△Hi)是用量熱的方法測定的。目的是建立一套新的直接測量蛋白在液/固界面上折疊的熱效應(yīng)和自由能的微量熱的方法。變性蛋白在疏水填料PEG-600上折疊并吸附時，所涉及的焓變包括三部分：吸附親合作用，去水合作用和分子構(gòu)象。25℃時，由去水合作用所導(dǎo)致的熵驅(qū)動促使變性蛋白溶菌酶分子在PEG-600表面吸附和復(fù)性。在25℃時溶菌酶的折疊路徑中相應(yīng)于0.8mol/LGuHCl時有一個較低

3、的“能壘”。25℃、35℃時在1.8mol/LGuHCl處都有一個相對較低的焓變，可能出現(xiàn)了類似于能量較低被稱為“能阱”的中間態(tài)。溶菌酶的折疊焓△△Hi比通常溶液中要高出10～100倍，是由于疏水填料PEG-600的表面給溶菌酶分子提供了足夠高的能量使它整個分子發(fā)生去水合作用并折疊成天然態(tài)的構(gòu)象，然而在通常的溶液中，溶菌酶只能部分折疊。溫度升高，體系中的分子運動加劇，有利于溶菌酶的折疊、復(fù)性，導(dǎo)致35℃時GuHCl濃度從1.3至2.6m