氙氣對新生大鼠腦白質(zhì)損傷CLIC4表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過檢測腦白質(zhì)損傷的新生大鼠CLIC4表達(dá)水平變化，探討氙氣對腦白質(zhì)損傷的神經(jīng)保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用氙氣治療新生兒腦損傷提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：制作新生大鼠腦白質(zhì)損傷模型：選取生后48-72小時(shí)的SD新生大鼠144只，隨機(jī)分為生理鹽水（NS）組（空白對照組）（n=24）、脂多糖（LPS）組（n=24）、缺氧缺血（HI）組（n=24）、脂多糖+缺氧缺血（LPS+HI）組（腦損傷對照組）（n=24），LPS組僅給予腹腔

2、注射LPS0.05mg/kg，HI組分離結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈以及置于8％的氮氧混合氣中1小時(shí)進(jìn)行缺氧缺血處理，LPS+HI組給予腹腔注射LPS0.05mg/kg，3小時(shí)后進(jìn)行缺氧缺血處理，建立腦白質(zhì)損傷模型。NS組僅給予腹腔注射等量生理鹽水，不結(jié)扎不低氧處理。氙氣干預(yù)處理：通過脂多糖聯(lián)合缺氧缺血建立腦白質(zhì)損傷模型后，根據(jù)50%氙氣吸入開始時(shí)間分為A組（缺氧缺血后即刻）（n=24）、B組（缺氧缺血后2小時(shí)）（n=24），進(jìn)行氙氣吸入3小時(shí)。各

3、組分別于干預(yù)處理后0小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)隨機(jī)各選取6只進(jìn)行甲醛灌注斷頭取腦，予蘇木素-伊紅染色（HE）觀察病理變化，髓鞘堿性蛋白(MBP)免疫熒光染色，并通過RT-PCR檢測腦組織中CLIC4mRNA水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.NS組、HI組、LPS組腦白質(zhì)染色清晰，結(jié)構(gòu)正常；LPS+HI組新生大鼠腦組織HE染色可見腦白質(zhì)染色淡、結(jié)構(gòu)疏松；神經(jīng)纖維走向紊亂，神經(jīng)細(xì)胞染色加深，體積縮小，核仁變小，突起減少；膠

4、質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多，可見細(xì)胞核固縮、胞漿疏松、細(xì)胞皺縮等凋亡改變。氙氣干預(yù)組新生大鼠腦白質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，可見部分核固縮，但較LPS+HI組減輕。
　　2.腦組織免疫熒光染色，在72小時(shí)，NS組、HI組和LPS組腦組織可見大量MBP陽性細(xì)胞；LPS+HI組MBP陽性細(xì)胞數(shù)較NS組明顯減少。氙氣干預(yù)組MBP陽性細(xì)胞較NS組減少、較LPS+HI組增多。
　　3.腦損傷對照組及氙氣干預(yù)組CLIC4mRNA的表達(dá)水平高于空白對照組，差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明損傷后腦組織中CLIC4mRNA的表達(dá)水平升高；但氙氣干預(yù)組CLIC4mRNA的表達(dá)水平低于腦損傷對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)腦損傷對照組新生大鼠腦組織中CLIC4mRNA表達(dá)水平較空白對照組升高，氙氣干預(yù)組新生大鼠腦組織CLIC4mRNA表達(dá)水平在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)較腦損傷對照組下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。但同日齡新生大鼠氙氣干預(yù)亞組中，

6、A組與B組新生大鼠腦組織中CLIC4mRNA表達(dá)水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明CLIC4mRNA表達(dá)水平的高低與進(jìn)行氙氣干預(yù)的時(shí)間點(diǎn)無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.腹腔注射LPS可與缺氧缺血共同作用，導(dǎo)致新生大鼠腦白質(zhì)損傷。
　　2.腦白質(zhì)損傷后可使腦組織中CLIC4基因表達(dá)水平升高，說明CLIC4可引起神經(jīng)細(xì)胞損傷。
　　3.氙氣干預(yù)能夠下調(diào)CLIC4基因表達(dá)水平，提示氙氣可能對中樞神經(jīng)系統(tǒng)