氙氣對3日齡新生大鼠腦白質(zhì)損傷腦組織CLIC4 mRNA、Bcl-2蛋白表達的影響.pdf

1、目的：腹腔內(nèi)注射脂多糖聯(lián)合缺氧缺血制作3日齡新生大鼠腦白質(zhì)損傷模型，并對腦白質(zhì)損傷新生大鼠給予氙氣干預(yù)。通過檢測其腦組織中CLIC4 mRNA、Bcl-2蛋白的表達,探討氙氣對新生大鼠腦白質(zhì)損傷的神經(jīng)保護作用機制。
　　方法：將3日齡SD新生大鼠120只隨機分為空白對照組（n=24），腦損傷組（n=24）和氙氣干預(yù)組（n=72）。空白對照組腹腔注射生理鹽水（0.05mg/kg），僅游離右側(cè)頸總動脈不做低氧處理；腦損傷組腹腔注射脂多

2、糖（lipopolysaccharide，LPS，0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動脈并進行低氧處理，但不進行氙氣處理；氙氣干預(yù)組腹腔注射LPS（0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動脈并進行低氧處理及氙氣吸入處理（50%氙氣+30%氧氣+20%氮氣的充滿20L恒溫密閉箱，0.5L/min緩慢維持，持續(xù)處理3小時）。根據(jù)腦損傷后氙氣延遲干預(yù)的時間（0小時、2小時和5小時），將氙氣干預(yù)組分為C1、C2、C3三個亞組（n=24）

3、。各組大鼠分別于0h、24h、48h、72h各取6只行多聚甲醛灌注后斷頭取腦組織，進行腦組織病理檢測、蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot,WB）檢測B淋巴細胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白含量、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriotion-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測氯離子通道蛋白4（Chloride Intracellular Channe

4、l4，CLIC4）mRNA的表達。采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析和Bonferroni法進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：（1）實驗新生鼠行為學監(jiān)測：腹腔注射脂多糖及缺氧缺血處理后，腦損傷組和氙氣干預(yù)組的新生鼠出現(xiàn)肢體抖動、煩躁、紫紺、呼吸急促等行為學異常；在氙氣處理之后，C1組新生鼠的癥狀在約2小時后消失；而腦損傷組、C2組和C3組的癥狀約在5小時后消失；空白對照組新生鼠未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)。
　?。?）HE染色觀察腦組織病理

5、變化：腦損傷組新生鼠可見腦白質(zhì)蒼白，結(jié)構(gòu)疏松，細胞腫脹，核膜不清楚，細胞核固縮，可檢測到細胞變性和壞死，神經(jīng)纖維無序，膠質(zhì)細胞數(shù)量增加；氙氣干預(yù)組腦白質(zhì)染色淡染，結(jié)構(gòu)相對較完整，較少細胞變性壞死，各亞組之間無明顯差異；而空白對照組腦組織結(jié)構(gòu)正常，染色清晰，細胞排列整齊。
　?。?）WB檢測Bcl-2蛋白含量:在相同時間點，各組Bcl-2蛋白的表達量相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與腦損傷組相比，C1組和C2組中Bcl-2

6、蛋白的表達在各時間點均顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但在C3中組的Bcl-2蛋白的表達在48h和72h與腦損傷組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與C1組相比，C2組和C3組Bcl-2蛋白表達在48h和72h顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　?。?）RT-PCR檢測CLIC4 mRNA含量：與空白對照組相比較，在各時間點腦損傷組中新生鼠腦室周圍白質(zhì)CLIC4 mRNA的表達水平增加，差異有統(tǒng)計學意義

7、（P＜0.05）；與腦損傷組相比較，氙氣干預(yù)各亞組中CLIC4 mRNA表達均明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　（1）腹腔內(nèi)注射LPS聯(lián)合缺氧缺血可成功制作新生兒大鼠腦白質(zhì)損傷模型；
　　（2）氙氣吸入干預(yù)可減輕新生兒大鼠腦白質(zhì)損傷，減少細胞壞死；
　?。?）新生大鼠腦白質(zhì)損傷后Bcl-2蛋白表達水平升高，氙氣可使其表達可下降，表明氙氣可能通過抑制神經(jīng)元凋亡進而減輕白質(zhì)損傷作用；