中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中腦內(nèi)皮細(xì)胞激活和白細(xì)胞招募的機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中CXCR2對(duì)腦內(nèi)皮細(xì)胞激活及白細(xì)胞招募的機(jī)制研究
　　目的:
　　多年來(lái)各種趨化因子及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的表達(dá)以及在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中對(duì)免疫細(xì)胞招募的促進(jìn)作用已被陸續(xù)報(bào)道，但趨化因子CXCL1及其受體CXCR2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中所發(fā)揮的作用及機(jī)制尚未深入展開研究，尤其是它們?cè)诿庖呒?xì)胞招募過(guò)程中對(duì)腦內(nèi)皮細(xì)胞激活的影響尚未明確。
　　方法:

2、　　在體內(nèi)，以LPS腦室注射的方法建立小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥模型，利用組化及活體顯微鏡方法檢測(cè)趨化因子CXCL1及其受體CXCR2對(duì)中性粒細(xì)胞招募的影響;此外，利用骨髓移植實(shí)驗(yàn)確定發(fā)揮作用的CXCR2的細(xì)胞定位。而在體外，以小鼠原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞為對(duì)象，利用Western Blotting和定量PCR技術(shù)檢測(cè)選擇素以及粘附分子的表達(dá)以評(píng)價(jià)CXCR2對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞激活的影響。
　　結(jié)果:
　　在LPS腦室注射誘導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎

3、癥模型中，腦內(nèi)檢測(cè)到高水平的趨化因子CXCL1，CXCL2和CXCL5，同時(shí)檢測(cè)到中性粒細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)血管中的滾動(dòng)和黏附以及其在腦實(shí)質(zhì)中的浸潤(rùn)。然而，給予CXCL1及CXCR2基因敲除小鼠腦室注射LPS后，中性粒細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦血管中的滾動(dòng)和黏附以及腦實(shí)質(zhì)中浸潤(rùn)的數(shù)目都顯著減少，此外我們又發(fā)現(xiàn)在CXCL1及CXCR2基因敲除小鼠腦實(shí)質(zhì)中選擇素P-selectin和粘附分子VCAM-1表達(dá)也有所降低，提示CXCR2可能影響腦內(nèi)皮

4、細(xì)胞的激活。骨髓移植實(shí)驗(yàn)顯示中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)部定居的細(xì)胞表面的CXCR2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中腦內(nèi)皮細(xì)胞激活和中性粒細(xì)胞招募過(guò)程中扮演重要角色。
　　此外星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌趨化因子CXCL1的能力遠(yuǎn)較小膠質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)，而利用星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)上清刺激野生型和CXCR2缺陷小鼠的原代腦內(nèi)皮細(xì)胞，與野生型相比CXCR2的缺陷導(dǎo)致了腦內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1和ICAM-1表達(dá)的降低，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清激活內(nèi)皮細(xì)胞的過(guò)程是CXCR2依賴的。而且T

5、NF-α和LPS刺激原代腦內(nèi)皮細(xì)胞后，其表面CXCR2表達(dá)顯著升高，但膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)TNF-α和LPS刺激后并未觀察到CXCR2的明顯升高。此外，給予小鼠尾靜脈注射CXCR2拮抗劑SB225002后，小鼠腦血管內(nèi)滾動(dòng)和粘附的白細(xì)胞顯著減少，同時(shí)腦內(nèi)皮細(xì)胞的激活也受到抑制。
　　結(jié)論:
　　在中樞神經(jīng)細(xì)胞炎癥中，星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的CXCL1和內(nèi)皮細(xì)胞表面的CXCR2在腦內(nèi)皮細(xì)胞激活和白細(xì)胞招募的過(guò)程中均扮演必要角色。
　　第

6、二部分 中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中補(bǔ)體成分C3a對(duì)腦內(nèi)皮細(xì)胞激活及白細(xì)胞招募的機(jī)制研究
　　目的:
　　近年來(lái)，各種補(bǔ)體成分及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中對(duì)免疫細(xì)胞招募的影響已被陸續(xù)報(bào)道，補(bǔ)體系統(tǒng)在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中表現(xiàn)出越來(lái)越關(guān)鍵的作用，某些補(bǔ)體成分缺陷的小鼠呈現(xiàn)減弱的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，但補(bǔ)體成分及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥中所發(fā)揮的作用機(jī)制尚未研究清楚。
　　方法:
　　在此研究中，使用腦立體定位儀腦室注射LPS

7、以構(gòu)建中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥模型，并借此研究補(bǔ)體成分C3在腦血管內(nèi)皮細(xì)胞激活和白細(xì)胞招募中的作用，利用中性粒細(xì)胞特異性酯酶染色方法檢測(cè)小鼠腦中浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞。利用活體顯微鏡技術(shù)檢測(cè)白細(xì)胞在腦血管表面粘附和滾動(dòng)的情況。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting方法檢測(cè)腦內(nèi)皮細(xì)胞的激活情況。在體外，使用C3a刺激原代腦內(nèi)皮細(xì)胞，通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)腦內(nèi)皮細(xì)胞的激活情況及其信號(hào)通路。
　　結(jié)果:
　　

8、C3基因敲除小鼠和C3aR基因敲除小鼠腦中皮質(zhì)和海馬區(qū)域的中性粒細(xì)胞數(shù)目較野生型小鼠顯著減少，而C6基因敲除小鼠腦中皮質(zhì)和海馬區(qū)域的中性粒細(xì)胞數(shù)目與野生型小鼠無(wú)顯著差異。同時(shí)我們也檢測(cè)C3基因敲除小鼠腦內(nèi)粘附和滾動(dòng)的白細(xì)胞數(shù)目也較野生型小鼠顯著減少，而且C3基因敲除小鼠腦內(nèi)P-selectin、E-selectin、ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)也顯著降低，進(jìn)一步我們使用眼鏡蛇毒因子腹腔注射野生型小鼠耗竭小鼠外周循環(huán)中的補(bǔ)體C3成分后

9、，也檢測(cè)到小鼠腦內(nèi)粘附分子VCAM-1和E-selectin的降低，同時(shí)小鼠腦血管內(nèi)粘附和滾動(dòng)的白細(xì)胞也顯著減少，提示外周循環(huán)中的C3成分可能促進(jìn)了腦內(nèi)皮細(xì)胞的激活。此外，C3基因敲除小鼠和野生型小鼠腦室注射TNF-α后，C3基因敲除小鼠腦內(nèi)粘附和滾動(dòng)的白細(xì)胞數(shù)目也較野生型小鼠顯著減少。在體外，使用C3a刺激原代腦內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞的VCAM-1和ICAM-1表達(dá)升高，而且原代腦內(nèi)皮細(xì)胞的NF-κB和P38通路被激活。
　　結(jié)論