雪蓮果試管塊根誘導(dǎo)及其發(fā)育相關(guān)基因片段的克隆.pdf

1、雪蓮果(Smallanthus sonchifolius)為菊科向日葵屬雙子葉草本植物，原產(chǎn)于南美安第斯山區(qū)。雪蓮果植株富含多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)等多種活性成分，具食用、藥用和環(huán)境保護(hù)綜合開(kāi)發(fā)利用的價(jià)值。目前，市場(chǎng)上雪蓮果供不應(yīng)求，而雪蓮果的推廣種植卻受到種源限制。因而我們開(kāi)展了雪蓮果試管塊根的離體誘導(dǎo)試驗(yàn)，同時(shí)借助SSH技術(shù)構(gòu)建了雪蓮果離體塊根發(fā)育相關(guān)基因的消減文庫(kù)。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）以葉片為外植體，采用正

2、交設(shè)計(jì)研究蔗糖、NAA和BA對(duì)雪蓮果試管塊根誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：NAA對(duì)葉片誘導(dǎo)試管塊根影響顯著，其次為蔗糖和NAA；篩選得到葉片誘導(dǎo)雪蓮果試管塊根的最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+BA3 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+蔗糖70 g·L-1。
　　（2）以莖段為外植體，采用正交設(shè)計(jì)研究蔗糖、NAA和BA對(duì)雪蓮果試管塊根誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：蔗糖對(duì)莖段誘導(dǎo)雪蓮果試管塊根影響顯著，其次為BA和NAA；篩選得到莖段誘導(dǎo)試管塊根的最優(yōu)培

3、養(yǎng)基為：MS+BA3 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+蔗糖70 g·L-1。
　?。?）以雪蓮果試管塊根為研究模型，取未膨大期的不定根為對(duì)照組，膨大期（10 d，15 d，20 d）的塊根為試驗(yàn)組，通過(guò)抑制差減雜交技術(shù)構(gòu)建了與雪蓮果塊根發(fā)育相關(guān)的差減文庫(kù)。經(jīng)初步篩選和測(cè)序獲得97個(gè)有效EST片段，利用GO分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)ESTs從細(xì)胞組分，生物過(guò)程和分子功能進(jìn)行了2級(jí)水平分類(lèi)。選取11個(gè)差異表達(dá)基因用Real-time PCR