mTOR信號通路在門靜脈高壓性脾腫大發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控機制及干預(yù)研究.pdf

1、本文對mTOR信號通路在門靜脈高壓性脾腫大發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控機制及干預(yù)進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：mTOR信號通路在肝硬化門靜脈高壓癥患者及動物模型的腫大脾臟中表達情況及其動態(tài)關(guān)系。
　　目的：探索mTOR信號通路在各種病因所致的門靜脈高壓性脾腫大中的活化水平，分析mTOR信號通路活化情況與各階段脾腫大發(fā)展的動態(tài)關(guān)系。
　　方法：收集肝硬化門靜脈高壓癥行脾臟切除術(shù)的腫大脾臟標(biāo)本及正常脾臟標(biāo)本，分為門靜

2、脈高壓癥組和非門靜脈高壓癥組；采用膽總管結(jié)扎離斷法和部分門靜脈結(jié)扎法制備大鼠門靜脈高壓癥模型，分為膽總管結(jié)扎組、部分門靜脈結(jié)扎組及假手術(shù)組，并再細分為1、3、7、14、21天時間點小組。通過組織形態(tài)學(xué)評估人體脾臟的病理改變；計數(shù)脾臟指數(shù)（脾臟重量/大鼠體重）評估脾臟大?。籛estern blot法測定mTOR信號通路下游標(biāo)記物p70S6K、S6、4E-BP1及其磷酸化狀態(tài)的表達量。
　　結(jié)果：人體脾臟標(biāo)本中，門靜脈高壓癥組脾臟體積

3、顯著大于非門靜脈高壓癥組（p<0.01）；兩組白髓面積百分比相近，但門靜脈高壓癥組脾臟中的Ki67陽性細胞、α-SMA陽性面積顯著大于非門靜脈高壓癥組（p<0.01），且分別集中在脾臟的白髓、紅髓區(qū)域。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)門靜脈高壓癥組脾臟中P-p70S6K、P-S6的相對表達量顯著高于非門靜脈高壓癥組（p<0.05）。動物實驗中，脾臟體積隨著造模時間進行性增大，同時伴隨著P-p70S6K、P-S6相對表達量的逐漸增加，提示

4、mTOR信號通路（mTOR/p70S6K/S6通路）的逐漸活化。
　　結(jié)論：增大的白髓體積和廣泛的血管新生等增生性病理改變是脾臟體積增大的重要原因之一。大鼠脾臟的進行性增大與mTOR信號通路的逐漸活化之間有一定的正相關(guān)性，提示mTOR信號通路（mTOR/p70S6K/S6通路）的逐漸活化可能是驅(qū)動脾臟進行增大的動力。
　　第二部分：雷帕霉素阻斷mTOR信號通路后對門靜脈高壓性脾腫大的作用及其機制。
　　目的：探索雷帕霉

5、素阻斷mTOR信號通路后對門靜脈高壓性脾腫大的作用及其機制。
　　方法：采用膽總管結(jié)扎離斷法和部分門靜脈結(jié)扎法制備大鼠門靜脈高壓癥模型，從造模第8天起給予雷帕霉素（2mg·kg-1day-1）或同等劑量的5％ DMSO腹腔注射兩周。各模型分為雷帕霉素組和安慰劑組。通過血流動力學(xué)監(jiān)測和脾臟指數(shù)（脾臟重量/大鼠體重）分別評估門靜脈壓力和脾臟大??；全自動血液分析儀測定血細胞計數(shù)；組織形態(tài)學(xué)評估脾臟病理改變；Western blot法測定

6、mTOR信號通路的活化水平、血管新生、炎癥反應(yīng)、凋亡等相關(guān)標(biāo)記蛋白的表達量。
　　結(jié)果：門靜脈高壓癥組大鼠脾臟白髓面積百分比顯著高于假手術(shù)組（p<0.05），且富集大量的Ki67陽性細胞。門靜脈高壓癥組大鼠脾臟紅髓中發(fā)現(xiàn)大量的VEGF、α-SMA及 Ki67陽性組織，且 VEGF及α-SMA蛋白表達量較假手術(shù)組顯著上調(diào)（p<0.05）。Masson染色發(fā)現(xiàn)門靜脈高壓癥組脾臟間質(zhì)中充斥大量的膠原纖維。門靜脈高壓癥組大鼠脾臟中檢測到顯