KCTD10特異抗體制備及其小鼠胚胎表達(dá)譜分析.pdf

1、人類的PDIP1(polymerase delta-interacting protein 1)基因是通過酵母雙雜交技術(shù)(yeast two-hybrid system)，以DNA聚合酶6的亞單位p50為誘餌，對(duì)HepG2細(xì)胞的cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選得到的一個(gè)新基因。借助NCBI的BLAST，在Genebank中發(fā)現(xiàn)人類另有兩個(gè)與人類PDIP1基因具有較高的同源性的基因KCTD10(potassiumChannel tetramerisa

2、tion domain containing 10)和TNFAIP1(tumor necrosis factor-induced protein 1)。他們都受TNF-α誘導(dǎo)表達(dá)，能與DNA聚合酶δ的小亞基和PCNA相互作用。生物信息學(xué)分析表明，在N-端都有一個(gè)BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和一個(gè)鉀離子四聚體通道結(jié)構(gòu)(K_tetra)。在C端區(qū)域，則是PCNA的結(jié)合基序(QTKV-EFP)。但KCTD10基因具體功能尚不清楚。 為了研究K

3、CTD10的功能，本文用KCTD10融合蛋白免疫新西蘭大白兔獲得兔抗KCTD10多克隆抗體。由于KCTD10蛋白與PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白有較高的蛋白序列相似性，KCTD10抗體同PDIP1蛋白、TNFAIP1蛋白有抗體交叉反應(yīng)。本文將同源蛋白PDIP1和TNFAIP1的部分降解的片段與抗KCTD10血清在4℃下孵育3 h從而消除KCTD10抗體的非特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)，成功地消除了KCTD10多克隆抗體對(duì)PDIP1蛋白和TNF