IL-17在大鼠不同牙周狀態(tài)壓力側(cè)牙槽骨中的表達(dá)和作用機(jī)制的初探.pdf

1、背景和目的:
　　牙齒移動(dòng)是通過(guò)對(duì)牙齒施加一定的矯治力將應(yīng)力傳遞到相應(yīng)的牙周組織，引起牙槽骨發(fā)生適應(yīng)性骨改建的過(guò)程。壓力側(cè)牙槽骨的骨組織在機(jī)械壓力和血流改變引起的低氧刺激作用下發(fā)生骨吸收，使牙齒產(chǎn)生移動(dòng)，最后達(dá)到矯治目的。2005年第三次全國(guó)口腔健康流調(diào)結(jié)果顯示，我國(guó)成年人70％～90％患有不同程度的牙周炎，隨著口腔保健意識(shí)的提升、正畸學(xué)和牙周病學(xué)的發(fā)展，正畸-牙周聯(lián)合治療已經(jīng)成為治療錯(cuò)合畸形伴牙周炎患者的常規(guī)治療方法。但是牙周炎

2、患者牙齒的移動(dòng)更易造成牙槽骨的損傷，因此我們提出疑問(wèn)，對(duì)于經(jīng)過(guò)牙周序列治療后需要正畸治療的患者，正畸力是否有利于牙槽骨改建？目前在臨床上缺乏評(píng)估牙周炎患者正畸牙移動(dòng)過(guò)程中牙周組織改建的檢測(cè)指標(biāo)，極大的束縛了正畸醫(yī)師的治療。
　　骨代謝動(dòng)態(tài)平衡是骨改建的基礎(chǔ)，由破骨細(xì)胞(Osteoclast，OC)介導(dǎo)的骨吸收和成骨細(xì)胞(Osteoblast，OB)介導(dǎo)的骨形成組成。OC作為骨改建的起始因素，它的數(shù)量與活性決定骨改建的進(jìn)程及最終結(jié)果

3、。RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是調(diào)節(jié)OC分化和骨吸收的信號(hào)傳導(dǎo)通路。核因子κB受體活化因子配體（Receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand，RNAKL）與OC表面受體核因子κB受體活化因子(Receptor activator of nuclear factor kappa-B，RNAK)相結(jié)合，促進(jìn)OC形成和分化，導(dǎo)致骨吸收。骨保護(hù)蛋白(osteoprotegerin，O

4、PG)是RANK的誘餌受體，可競(jìng)爭(zhēng)性的與RANKL結(jié)合，抑制OC生成和骨吸收。所以，骨中RANKL與OPG的相對(duì)濃度是骨量和強(qiáng)度的主要決定因素。
　　正畸牙移動(dòng)是周期性牙周膜改建和骨組織重塑的過(guò)程，同時(shí)也是非感染性、微創(chuàng)傷性的炎癥反應(yīng)過(guò)程。目前研究認(rèn)為決定炎癥發(fā)展方向的是免疫反應(yīng)。IL-17通過(guò)炎癥介導(dǎo)和骨破壞作用參與牙周炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。但在牙周炎患者的正畸牙移動(dòng)過(guò)程中，IL-17的表達(dá)和作用鮮有報(bào)道。
　　基于IL-17

5、對(duì)骨代謝的重要調(diào)節(jié)作用，本論文通過(guò)建立大鼠在正常和炎性牙周狀態(tài)下的正畸牙移動(dòng)模型，分析IL-17在不同牙周狀態(tài)壓力側(cè)牙槽骨中的表達(dá)，并探究正畸力和炎癥的雙重作用下壓力側(cè)牙槽骨組織改建的分子機(jī)制。擬了解成人牙周炎患者牙周治療后對(duì)正畸力的反應(yīng)、壓力側(cè)牙槽骨的改建，探討成人牙周炎患者正畸治療過(guò)程中牙齒移動(dòng)的特點(diǎn)，并為牙周炎患者的正畸治療提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　64只8周齡雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成4組，分別為空白對(duì)

6、照組（A組）、加力組（B組）、炎癥組（C組）、炎性加力組（D組）。B組用鎳鈦拉簧50g力近中移動(dòng)大鼠右側(cè)上頜第一磨牙。C、D組通過(guò)牙齦剝離+絲線結(jié)扎+高糖飼養(yǎng)建立牙周炎模型，C組建模后去除上述因素并清理干凈。D組則去除上述因素后用鎳鈦拉簧50g力近中移動(dòng)大鼠右側(cè)上頜第一磨牙。并分別于加力0，3，7，14天處死。其中16只用于組織形態(tài)學(xué)觀察，確定模型建立成功，24只用于qRT-PCR檢測(cè)各組IL-17 mRNA以及D組RANKL、OPGm

7、RNA表達(dá)，24只用于WesternBlot檢測(cè)各組IL-17蛋白及D組RANKL、OPG蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)臨床觀察結(jié)果:正常大鼠牙齦呈有光澤的粉紅色，邊緣菲薄，質(zhì)地堅(jiān)韌。絲線結(jié)扎4W后，絲線上有大量的軟垢和食物殘?jiān)?去除絲線后，牙齦暗紅色，質(zhì)地松軟，探診出血。加力3天后，大鼠上頜第一磨牙和第二磨牙之間出現(xiàn)間隙，上頜第一磨牙近中移動(dòng)。加力14天，移動(dòng)距離最大。以上表明大鼠正畸牙移動(dòng)模型、實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型和牙周

8、炎大鼠正畸牙移動(dòng)模型成功建立。
　　(2) HE染色結(jié)果: A組牙周膜纖維排列規(guī)則，牙槽骨表面較平整。B組加力第3，7天，壓力區(qū)牙周間隙變窄，牙周纖維排列紊亂，張力區(qū)牙周間隙變寬;加力第14天，壓力區(qū)OC數(shù)量減少，張力區(qū)新骨沉積。C組建模后0天后，可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，牙槽嵴頂高度降低。建模后第3，7，14天，炎癥逐漸消退。D組破骨最為活躍。
　　(3)qRT-PCR和Western Blot結(jié)果:與A組相比，C組牙槽骨中IL-

9、17 mRNA水平呈現(xiàn)高表達(dá)，且隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，第14天能達(dá)到正常水平。在正常和炎性牙周組織狀態(tài)下，正畸力誘導(dǎo)IL-17在壓力側(cè)牙槽骨中的表達(dá)變化隨加力時(shí)間延長(zhǎng)呈規(guī)律性變化，先升高后降低，第7天達(dá)峰值。在炎性狀態(tài)下牙槽骨中IL-17mRNA水平呈現(xiàn)更高表達(dá)。各實(shí)驗(yàn)組IL-17蛋白表達(dá)趨勢(shì)同IL-17 mRNA表達(dá)變化基本一致。D組壓力側(cè)牙槽骨中RANKLm砌、『A以及RANKL/OPG比值隨加力時(shí)間延長(zhǎng)而變化的趨勢(shì)與IL-17mRNA

10、的表達(dá)趨勢(shì)基本一致。RANKL和OPG蛋白表達(dá)變化和RANKL、OPGmRNA表達(dá)變化一致。
　　結(jié)論:
　　(1) IL-17在正常及炎性牙槽骨中存在，并參與正常及炎性牙周組織狀態(tài)下正畸牙移動(dòng)過(guò)程中壓力側(cè)牙槽骨改建。
　　(2)在炎性牙周組織中，正畸力可以誘導(dǎo)IL-17mRNA釋放增加，炎癥化學(xué)信號(hào)和機(jī)械力產(chǎn)生協(xié)同作用使得炎癥效應(yīng)疊加，影響壓力側(cè)牙槽骨改建。
　　(3) IL-17可能通過(guò)RANKL/RANK/