IL-17和RANKL在CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜的表達(dá)及藥物干預(yù).pdf

1、目的：
　　 建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠作為研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)的動物模型。通過檢測白細(xì)胞介素17(interleukin-17,IL-17)、細(xì)胞核因子-κB受體活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL)在CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜的表達(dá),研究

2、兩者在CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜病變發(fā)生發(fā)展中的作用。觀察來氟米特(leflunomide,LEF)及99锝-亞甲基二膦酸鹽(technetium-99tertiary diphosphine,99Tc-TDP)對IL-17、RANKL在CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜表達(dá)的影響,探討LEF及99Tc-TDP的干預(yù)作用。
　　 方法：
　　 80只雌性SD大鼠隨機(jī)選取10只為空白對照組,其余70只為造模組。造模組自鼠尾至鼠背皮下多點(diǎn)注射雞Ⅱ型

3、膠原乳劑(0.5mg/只),一周后以相同方法相同劑量加強(qiáng)免疫,空白對照組注射等量生理鹽水。四周后造模組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index,AI)評分,選取AI≥6分者40只隨機(jī)分為模型灌胃組、模型靜脈組、LEF組、99Tc-TDP組,每組10只。LEF組和99Tc-TDP組分別予LEF(5mg/kg/d,2ml)灌胃、99Tc-TDP(0.05μg/kg/d99Tc,1ml)尾靜脈注射?？瞻讓φ战M、模型灌胃組予2ml生理鹽水

4、灌胃,模型靜脈組予1ml生理鹽水尾靜脈注射,持續(xù)三周。每周測量大鼠體重、足爪容積、AI值。藥物干預(yù)結(jié)束后,各組大鼠心臟取血,留取關(guān)節(jié)液,采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定大鼠血清及關(guān)節(jié)液IL-17、RANKL濃度。留取膝關(guān)節(jié)滑膜組織,蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察關(guān)節(jié)滑膜病理,計(jì)算滑膜病理積分,免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測關(guān)節(jié)滑膜IL-17、RANKL蛋白的表達(dá),用I

5、mage-Pro Plus6.0圖像分析軟件半定量分析。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),各組均數(shù)間比較采用單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 ①造模組70只大鼠分別于造模后1周、2周各死亡2只,造模成功大鼠48只,出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫痛、關(guān)節(jié)強(qiáng)直,成功率約68.6％。
　　 ②模型灌胃組、模型靜脈組、LEF組和99Tc-TDP組大鼠足爪容積大于空白對照組(P<0.05),模型兩組無顯著性差異(P>0.05)。給藥

6、1周后LEF組足爪容積小于模型組和99Tc-TDP組(P<0.01)。給藥2周后LEF組足爪容積小于99Tc-TDP組(P<0.01),99Tc-TDP組足爪容積小于模型組(P<0.01)。給藥2周后LEF組和99Tc-TDP組AI值低于模型組(P<0.01)。給藥3周后LEF組AI值低于99Tc-TDP組(P<0.01)。
　　 ③模型灌胃組和模型靜脈組大鼠關(guān)節(jié)滑膜病理積分高,兩組無顯著性差異(P>0.05),LEF組和99T

7、c-TDP組較模型組低(P<0.05),LEF組較99Tc-TDP組低(P<0.05)。
　　 ④模型灌胃組、模型靜脈組、LEF組和99Tc-TDP組大鼠血清、關(guān)節(jié)液IL-17濃度及關(guān)節(jié)滑膜IL-17蛋白表達(dá)較空白對照組增加(P<0.01),模型兩組無顯著性差異(P>0.05),LEF組和99Tc-TDP組較模型組降低(P<0.05),LEF組較99Tc-TDP組降低(P<0.05)。
　　 ⑤各組大鼠血清RANKL濃度

8、無顯著性差異(P>0.05)。模型灌胃組、模型靜脈組、LEF組和99Tc-TDP組大鼠關(guān)節(jié)液RANKL濃度及關(guān)節(jié)滑膜RANKL蛋白表達(dá)較空白對照組增加(P<0.01),模型兩組無顯著性差異(P>0.05),LEF組和99Tc-TDP組較模型組降低(P<0.05),99Tc-TDP組較LEF組降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 ①應(yīng)用雞Ⅱ型膠原乳劑可成功誘導(dǎo)CIA大鼠動物模型。
　　 ②IL-17和RANK