膀胱癌BIU-87細(xì)胞株導(dǎo)向肽NYZL1靶向特異性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　通過體內(nèi)、外檢測技術(shù)驗(yàn)證腫瘤導(dǎo)向肽 NYZL1與膀胱癌 BIU-87細(xì)胞及其移植瘤結(jié)合的靶向特異性，為膀胱癌的分子靶向診療奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　首先采用多肽固相合成法合成導(dǎo)向肽NYZL1及其陰性對照肽svNYZL1，用異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）修飾，制備實(shí)驗(yàn)組和對照組熒光分子探針；然后向膀胱癌BIU-87細(xì)胞懸液中分別加入兩種探針孵育，流式細(xì)

2、胞儀（FCM）檢測細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度值，明確探針與細(xì)胞的親和作用；再將膀胱癌BIU-87細(xì)胞爬片，分別加入兩種探針孵育，激光共聚焦顯微鏡（LSCM）觀察探針與細(xì)胞結(jié)合的熒光圖像，明確其親和作用特異性；最后選取16只SPF級BALB/c-nu雄性裸鼠。3～4周齡。體質(zhì)量15～18g。成功構(gòu)建膀胱癌BIU-87細(xì)胞荷瘤裸鼠模型。采用完全隨機(jī)分組法分為2組，每組8只，尾靜脈分別注入兩種探針，4 h后，實(shí)驗(yàn)組和對照組各取5只荷瘤裸鼠，完整剖取腫瘤

3、組織、心、肝、脾、肺、腎、膀胱和膽囊，光學(xué)分子成像系統(tǒng)觀察腫瘤及各組織的熒光圖像；24 h后，實(shí)驗(yàn)組和對照組各取3只荷瘤裸鼠，完整剖取腫瘤組織、心、肝、脾、肺、腎和膀胱，制作冰凍切片，LSCM觀察腫瘤及各組織的熒光圖像。
　　結(jié)果：
　　1、成功合成實(shí)驗(yàn)組探針 FITC-氨基己酸-CSSPIGRHC（FITC-NYZL1），對照組探針FITC-氨基己酸-CRIGSPHSC（FITC-svNYZL1）。
　　2、體外研究

4、發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)CM檢測體外實(shí)驗(yàn)組和對照組探針標(biāo)記BIU-87細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度值分別為50.34±3.63和17.72±1.57，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。LSCM觀察實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞可見明顯的綠色熒光圖像，而對照組細(xì)胞未見明顯的綠色熒光圖像。兩組細(xì)胞FITC的平均熒光強(qiáng)度值分別為864.41±188.47和53.57±17.50，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3、體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，光學(xué)分子成像系統(tǒng)觀察下，腫瘤組織、膽囊