維生素E對苯并[a]芘誘導(dǎo)SD雄性大鼠生殖毒性的拮抗作用.pdf

1、隨著生活水平的改善，生殖類疾病，如不孕不育癥的發(fā)生在不斷地增加，因此生殖系統(tǒng)的健康也越來越受到公眾的重視。作為多環(huán)芳香烴（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）的代表物，苯并[a]芘（Benzo[a]pyrene，B[a]P）是確定的具有生殖毒作用的有機(jī)物。既往有關(guān)B[a]P生殖毒性的研究表明，B[a]P暴露會影響大鼠睪丸精液量、精子數(shù)目以及精子存活率。B[a]P會通過氧化應(yīng)激、參與DNA損傷等途徑

2、對生殖系統(tǒng)發(fā)揮毒作用。維生素E（Vitamin E）是人體當(dāng)中，最富有的脂溶性抗氧化劑，它能夠參加到氧自由基在體內(nèi)的反應(yīng)中，從而致使鏈?zhǔn)椒磻?yīng)出現(xiàn)中斷。有資料報道，維生素E的使用能夠促進(jìn)性激素分泌，使男子精子質(zhì)量增加。ATP酶是機(jī)體中負(fù)責(zé)傳送信息和傳播能量的重要物質(zhì)，ATP酶在體內(nèi)水平的高低，會直接對細(xì)胞內(nèi)外的Ca2+量產(chǎn)生影響。ATP酶活性降低會引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，Ca2+則會引發(fā)膜磷脂降解、線粒體能量生成減少，導(dǎo)致組織功能和代謝紊

3、亂。兒童和PAHs職業(yè)接觸者，作為PAHs的高危人群，目前卻沒有藥物能夠有效預(yù)防PAHs帶來的危害。因此本研究用維生素E來探討其是否對B[a]P所引起的雄性SD大鼠的生殖毒作用具有拮抗作用以及作用機(jī)制。
　　目的：
　　探討維生素E對B[a]P所誘導(dǎo)的、對雄性SD大鼠的生殖毒性是否存在著有效地拮抗作用；通過觀察和檢測染毒大鼠的睪丸組織形態(tài)及組織內(nèi)ATP酶活性和Ca2+濃度的改變，來探討B(tài)[a]P的生殖毒性發(fā)生機(jī)制。并且，通過

4、給予不同劑量的維生素E，來探討維生素E與B[a]P之間是否存在著劑量反應(yīng)關(guān)系。
　　方法：
　　將60只4周齡大鼠，隨機(jī)地分入到空白對照組、溶劑對照組、B[a]P組、低劑量維生素E（10mg/kg/d）+B[a]P組、中劑量維生素E（50mg/kg/d）+B[a]P組和高劑量維生素E（100mg/kg/d）+B[a]P組中，B[a]P的實驗用量為5mg/kg，持續(xù)灌胃處理30天。B[a]P溶于植物油中備用，溶劑對照組則會給予

5、植物油灌胃。檢測精液的質(zhì)量，睪丸臟器系數(shù)，并觀察睪丸的損傷狀況；使用試劑盒檢測睪丸組織中8-OHdG與MDA含量,SOD與GSH-Px活性以及細(xì)胞ATP酶活性，以此觀測睪丸的氧化損傷情況及ATP酶的水平變化；通過對睪丸組織進(jìn)行HE染色以及彗星實驗，鏡下觀察睪丸形態(tài)學(xué)改變及生殖細(xì)胞中DNA損傷與否；熒光標(biāo)記法測量睪丸Ca2+含量變化。
　　結(jié)果：
　　1、1）B[a]P染毒組與對照組相比，睪丸的臟器系數(shù)、精子數(shù)目和精子的活動度

6、明顯降低，并且精子畸形率出現(xiàn)了增高。
　　2）高劑量維生素E的使用，使精子質(zhì)量和睪丸臟器系數(shù)損傷明顯好轉(zhuǎn)。10 mg/kg/d劑量的維生素E，拮抗效果并不理想。
　　3）HE染色顯示，B[a]P暴露造成了睪丸組織生精細(xì)胞數(shù)量顯著的減少。加入維生素E的各組，生精細(xì)胞的數(shù)量明顯增多，維生素E緩解了生殖細(xì)胞損傷。
　　2、B[a]P暴露組較對照組，睪丸組織中SOD、與GSH-Px的活性明顯降低，而MDA與8-OHdG含量出現(xiàn)

7、增高。在中劑量與高劑量的維生素E進(jìn)行干擾后，SOD與GSH-Px的活性得到明顯改善，MDA與8-OHdG的含量則明顯降低。
　　3、B[a]P染毒組 Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活性明顯低于對照組。中、高劑量維生素 E+B[a]P組較B[a]P染毒組，Na+-K+-ATPase與Ca2+-Mg2+-ATPase活性顯著增強(qiáng)。
　　4、B[a]P染毒組Ca2+濃度增高顯著,50 mg/kg、100 mg

8、/kg維生素E+B[a]P組Ca2+濃度降低明顯，低劑量維生素E組卻未見到明顯變化。
　　5、彗星實驗發(fā)現(xiàn)，B[a]P暴露組彗星數(shù)量明顯多于對照組，并且隨著使用的維生素E劑量的增加，鏡下觀察到的彗星數(shù)目明顯減少。
　　結(jié)論
　　1、B[a]P暴露誘導(dǎo)的生殖損害可能機(jī)制為：
　　1）大鼠的睪丸組織發(fā)生了生殖細(xì)胞的氧化損傷。
　　2）睪丸中發(fā)生了生殖細(xì)胞的DNA氧化損傷，造成了細(xì)胞凋亡。
　　3）睪丸組織