喜樹營(yíng)養(yǎng)器官的結(jié)構(gòu)及喜樹堿含量動(dòng)態(tài)變化的研究.pdf

1、喜樹(CamptothecaacuminataDecne.)，隸屬于藍(lán)果樹科(Nyssaceae)，為多年生落葉喬木，我國(guó)特有樹種，主要分布在長(zhǎng)江流域及西南各省。全株因富含具獨(dú)特抗癌機(jī)理的喜樹堿而深得植物學(xué)界和醫(yī)藥學(xué)界的親睞。本文利用植物解剖學(xué)的方法研究了喜樹營(yíng)養(yǎng)器官的結(jié)構(gòu)；通過(guò)組織培養(yǎng)的方法分別對(duì)喜樹營(yíng)養(yǎng)器官進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代，并篩選出不同的細(xì)胞系，運(yùn)用HPLC法測(cè)定各愈傷組織中喜樹堿的含量，并在培養(yǎng)基中外加誘導(dǎo)子，分析其對(duì)愈傷

2、組織中喜樹堿含量的影響；通過(guò)對(duì)喜樹不同器官、不同地理種源、不同季節(jié)變化、不同發(fā)育階段等喜樹堿含量的動(dòng)態(tài)變化分析，總結(jié)出喜樹堿積累的一些基本規(guī)律；運(yùn)用UV-B輻射分別對(duì)1年生和2年生喜樹進(jìn)行處理，通過(guò)對(duì)各項(xiàng)生理指標(biāo)及喜樹堿含量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)UV-B輻射能明顯提高喜樹中喜樹堿的含量。通過(guò)以上方法的系統(tǒng)研究，取得的主要結(jié)果如下： 1.喜樹根尖縱切面的結(jié)構(gòu)與一般雙子葉植物結(jié)構(gòu)相同，由根冠、分生區(qū)、伸長(zhǎng)區(qū)和根毛區(qū)四個(gè)部分組成。根和莖的初生結(jié)

3、構(gòu)都由表皮、皮層和維管柱3部分組成。在根和莖初生結(jié)構(gòu)的皮層和髓部具有被鋨酸染成黑色的嗜鋨細(xì)胞。在次生生長(zhǎng)中，根的木栓形成層起源于中柱鞘，莖的木栓形成層起源于皮層細(xì)胞；隨著次生維管組織的增加，莖的中央形成髓腔。通過(guò)掃描電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡觀察，喜樹葉的上表皮沒有氣孔器分布；下表皮氣孔器的保衛(wèi)細(xì)胞呈腎形，沒有副衛(wèi)細(xì)胞，被幾個(gè)表皮細(xì)胞不規(guī)則的圍繞，屬于無(wú)規(guī)則型。在上下表皮均分布著單細(xì)胞非腺毛和兩種類型的腺毛，其中下表皮的分布相對(duì)稠密；上表皮

4、腺毛呈球形，下表皮腺毛大部分為長(zhǎng)卵形，其中間雜著一些球形腺毛。通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)，越幼嫩的葉中，分布的腺毛和非腺毛越多。葉片由表皮、葉肉和葉脈組成，葉肉細(xì)胞中分布有嗜鋨細(xì)胞。 2.不同外植體誘導(dǎo)的愈傷組織經(jīng)繼代培養(yǎng)后，篩選紅色、黃色和褐色三個(gè)不同的細(xì)胞系，分別測(cè)定其喜樹堿的含量。結(jié)果表明，經(jīng)幼葉所誘導(dǎo)的愈傷組織中喜樹堿含量相對(duì)高于其它，芽和莖誘導(dǎo)的愈傷組織中喜樹堿含量相差不大；紅色和黃色的細(xì)胞系在不同的外植體中其喜樹堿含量均高于褐色的

5、細(xì)胞系。但從整體看來(lái)，愈傷組織中喜樹堿的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于原植物中的含量，僅占原植物含量的百分之幾。外加誘導(dǎo)子對(duì)愈傷組織中喜樹堿的含量有影響，濃度為0.1mg/L，1mg/L的水楊酸和茉莉酸甲酯處理的愈傷組織中喜樹堿含量提高，0.1mg/L的水楊酸對(duì)喜樹堿的積累有明顯的促進(jìn)作用，茉莉酸甲酯的影響不大；濃度為3mg/L，5mg/L的水楊酸處理的愈傷組織中，喜樹堿含量降低；3mg/L的茉莉酸甲酯處理的愈傷組織中，喜樹堿含量降低，5mg/L處理的愈

6、傷組織中未檢測(cè)到喜樹堿。 3.不同器官中，喜樹堿含量以幼葉、種子和幼枝中較高，木質(zhì)部中較低，髓中含量最少，同一植株中，項(xiàng)枝喜樹堿的含量高于側(cè)枝。不同地理種源的1年生和2年生喜樹幼枝中喜樹堿均以四川成都含量最高，2年生喜樹幼枝中喜樹堿含量均高于1年生的。在一個(gè)生長(zhǎng)季中，2年生和3年生喜樹幼枝和幼葉中喜樹堿含量呈現(xiàn)季節(jié)性變化，從4月份新枝萌動(dòng)到7月份生長(zhǎng)旺盛期，喜樹堿含量逐漸增高，7月份喜樹堿含量達(dá)到最高，以后逐漸降低。另外2年生植

7、株枝葉的含量均高于3年生。從時(shí)間、空間研究葉的發(fā)育表明，隨著葉的發(fā)育成熟，葉中喜樹堿的含量逐漸降低。同一葉的不同部位，喜樹堿含量也有差異。 4.UV-B輻射對(duì)喜樹葉內(nèi)葉綠素、MDA、Fpro和SOD活性均產(chǎn)生一定的影響。隨著UV-B輻射時(shí)間的增加，葉綠素含量不斷降低；Fpro的含量不斷增加；MDA含量的變化不太顯著，但總體呈上升趨勢(shì)；SOD活性先下降，后上升，再下降；各器官中喜樹堿含量比對(duì)照都有增加，其中幼葉和幼莖中喜樹堿含量增