花背蟾蜍胚胎發(fā)育過程中鰓的顯微結(jié)構(gòu)變化及細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、兩棲類動物鰓的發(fā)育是一個復(fù)雜的過程，包括外鰓期、內(nèi)鰓期、內(nèi)鰓退化等階段。本研究以花背蟾蜍發(fā)育過程中的鰓為研究對象，運用石蠟切片、半薄切片、透射電鏡、免疫組化等相關(guān)技術(shù)，研究了花背蟾蜍鰓的發(fā)生，發(fā)育，退化過程中的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡的變化規(guī)律，探論了細(xì)胞凋亡與鰓發(fā)育之間的關(guān)系。 結(jié)果表明花背蟾蜍鰓的發(fā)生是從胚胎發(fā)育第15期鰓原基開始出現(xiàn)，隨著發(fā)育，鰓原基分化出鰓板，鰓板繼續(xù)分化出鰓弓，接著由鰓弓分化出外鰓，到胚胎發(fā)育20期形成以外鰓

2、為呼吸器官的呼吸系統(tǒng)。外鰓進(jìn)一步發(fā)育，形成了三排指狀外鰓，到22—23期，達(dá)到發(fā)育高峰。到胚胎發(fā)育25期，外鰓被鰓蓋包在鰓蓋腔里面，內(nèi)鰓開始形成，同時外鰓開始退化消失。內(nèi)鰓的發(fā)育是首先由鰓弓上的突起形成鰓葉，其次鰓葉上出現(xiàn)初級突起，隨著進(jìn)一步發(fā)育出現(xiàn)次級突起和三級突起，直到內(nèi)鰓發(fā)育最高峰(胚胎發(fā)育的36期)。隨后進(jìn)入變態(tài)期，內(nèi)鰓開始退化，首先是三級突起開始萎縮，其次是次級突起和初級突起，最后是鰓弓，直至鰓弓完全消失，變態(tài)完成。

3、電鏡結(jié)果表明花背蟾蜍外鰓與內(nèi)鰓具有相同的呼吸上皮，為扁平狀，上皮細(xì)胞質(zhì)中富含粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及空泡和線粒體；氣血屏障由由單層上皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞以及二者之間的基底膜構(gòu)成，隨著個體的發(fā)育，氣血屏障逐漸變薄。 在電鏡下可見外鰓(25期)與內(nèi)鰓退化時期(37-39期)鰓上的凋亡細(xì)胞，鰓細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變表現(xiàn)為：細(xì)胞體積明顯縮小，形狀改變；細(xì)胞胞質(zhì)空泡化十分顯著，胞漿濃縮，胞質(zhì)減少，細(xì)胞質(zhì)電子密度大，呈深色；胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)模糊不清，數(shù)目明顯

4、減少或消失；細(xì)胞核凝集，染色質(zhì)固縮，積聚成致密塊，并伴有“凋亡小體”出現(xiàn)。但凋亡細(xì)胞出現(xiàn)機(jī)率最多的是外鰓與內(nèi)鰓退化時期，即發(fā)育過程中的25期與37、38、39期。 TUNEL免疫組化結(jié)果表明花背蟾蜍胚胎發(fā)育以下階段都存在細(xì)胞陽性反應(yīng)，但反應(yīng)程度不同，23、24、27、31、35、36期有少量的細(xì)胞呈陽性，而在25、37、38期有大量的細(xì)胞呈陽性。表明在花背蟾蜍胚胎鰓的整個發(fā)育過程中都存在著細(xì)胞凋亡，但只有在外鰓和內(nèi)鰓退化階段出現(xiàn)