人工養(yǎng)殖菲牛蛭（Poecilobdella manillensis Lesson，1842）抗凝血活性物質(zhì)含量動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、本論文主要研究了在人工養(yǎng)殖條件下，不同時(shí)期的菲牛蛭體內(nèi)抗凝血物質(zhì)含量的動(dòng)態(tài)變化情況，同時(shí)優(yōu)化了菲牛蛭活體、干體、唾液腺分泌物中的抗凝血活性物質(zhì)的提取方法和檢測(cè)方法。 1．由于菲牛蛭抗凝血活性物質(zhì)提取方法的多樣性，我們選擇了一些具有代表性的方法(蒸餾水直接提取、有機(jī)溶劑去除雜質(zhì)蛋白、鹽析等方法)進(jìn)行提取以體外抗凝血活性為指標(biāo)，通過(guò)定性(凝血酶直接滴定法)和定量(ChromonymTH為生色底物的比色法)的方法檢測(cè)后，選定了最適合提

2、取抗凝血活性物質(zhì)的方法。同時(shí)優(yōu)化了提取工藝和檢測(cè)方法。 2．人工養(yǎng)殖條件下，由于菲牛蛭取食機(jī)會(huì)比較多，所以菲牛蛭的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)曲線，類似于連續(xù)生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)曲線。在不同的養(yǎng)殖時(shí)期，隨著菲牛蛭年齡的增加，每條菲牛蛭體內(nèi)的抗凝血物質(zhì)含量逐漸增加，但增長(zhǎng)速度比菲牛蛭體重增加速度要低，因此單位質(zhì)量菲牛蛭體內(nèi)的抗凝血物質(zhì)含量反而逐漸減少。由于菲牛蛭體內(nèi)的抗凝血物質(zhì)含量在前三個(gè)月增長(zhǎng)速度比較快，所以考慮到養(yǎng)殖成本，提取抗凝血物質(zhì)的菲牛蛭應(yīng)該最好是三月

3、齡以上的菲牛蛭。 3．菲牛蛭是一種重要的中藥材，在加工菲牛蛭時(shí)候，一般采取直接曬干的方法，而本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，菲牛蛭體內(nèi)抗凝血活性物質(zhì)含量在曬干過(guò)程中會(huì)急劇下降，所以如果是利用菲牛蛭提取抗凝血物質(zhì)時(shí)候，應(yīng)該直接利用菲牛蛭的活體進(jìn)行快速處理，而不要采取曬干的方法進(jìn)行處理。 4．菲牛蛭體內(nèi)的抗凝血物質(zhì)大多分布在頭部，當(dāng)吸取血液后，會(huì)有一小部分抗凝血物質(zhì)隨體液流到全身，這導(dǎo)致空腹時(shí)候的菲牛蛭和飽食時(shí)候的菲牛蛭的尾部抗凝血物質(zhì)含量不一

4、樣。在空腹時(shí)候，菲牛蛭尾部抗凝血物質(zhì)含量比較低；而飽食時(shí)候，菲牛蛭尾部抗凝血物質(zhì)含量顯著高于空腹時(shí)候(P<0.05)。 5．菲牛蛭吸取血液后，會(huì)有一部分抗凝血物質(zhì)隨吸取的血液流到全身，利用一種特殊的誘吐劑處理后，使菲牛蛭將體內(nèi)部分抗凝血物質(zhì)分泌出來(lái)，再進(jìn)行高效提取，結(jié)果提取的抗凝血活性物質(zhì)含量也比較高，這樣就得到一種既能夠取出這一部分抗凝血物質(zhì)，又能夠不處死菲牛蛭的方法，可以對(duì)菲牛蛭進(jìn)行重復(fù)利用，可以大大緩解菲牛蛭的供求矛盾，保