可口革囊星蟲血細(xì)胞的分類和單克隆抗體的制備.pdf

1、本文分別采用密度梯度離心、熒光顯微鏡觀察、瑞氏染色和透射電鏡觀察等四種方法對(duì)可口革囊星蟲的血細(xì)胞進(jìn)行分類，將其分為兩類：透明細(xì)胞和顆粒細(xì)胞，其中顆粒細(xì)胞又分為兩個(gè)亞型：大顆粒細(xì)胞和小顆粒細(xì)胞。 經(jīng)密度梯度離心，血細(xì)胞在淋巴細(xì)胞分離液中被分為兩層，透明細(xì)胞主要位于上層，顆粒細(xì)胞則大部分位于下層。 在熒光顯微鏡下可觀察到血細(xì)胞的自發(fā)熒光，在不同波長(zhǎng)下透明細(xì)胞與顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的自發(fā)熒光不同。 利用瑞氏染色法光鏡下觀察，透

2、明細(xì)胞大多數(shù)為圓形或橢圓形，細(xì)胞質(zhì)透明或淡紫色，細(xì)胞表面光滑無胞突，胞質(zhì)稀少，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)無明顯顆粒，核質(zhì)比小。細(xì)胞核為粉色，核中含有深色的致密物質(zhì)。小顆粒細(xì)胞比透明細(xì)胞小，細(xì)胞質(zhì)呈黃色或棕黃色，并且其中含有很多黑色顆粒，細(xì)胞核呈粉色圓形，核質(zhì)比大。大顆粒細(xì)胞數(shù)目最少，胞質(zhì)中充滿了大的紫黑色的致密顆粒，細(xì)胞核粉紫色。 透射電鏡下觀察，透明細(xì)胞幾乎不含細(xì)胞器，核內(nèi)常染色質(zhì)豐富。小顆粒細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體等許多的

3、細(xì)胞器，還含有電子致密顆粒，有偽足。大顆粒細(xì)胞中充滿了電子致密顆粒。 以可口革囊星蟲的血細(xì)胞作為抗原免疫Balb/C小鼠，取其脾臟，聚乙二醇為融合劑，將免疫小鼠的脾細(xì)胞和Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，用Gibco公司的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)雜交瘤上清液，檢測(cè)得到大量陽性雜交瘤細(xì)胞，最終得到 8 株具有較高分泌能力的雜交瘤細(xì)胞凍存?zhèn)溆谩?有限稀釋法克隆了8株陽性雜交瘤