RhD陰性個體遺傳多態(tài)性與抗-D同種免疫關系研究.pdf

1、目的：
　　通過對血清學試驗確認RhD陰性個體的RHD基因型檢測，研究不同類型遺傳學背景RhD陰性個體與抗-D同種免疫的關系。重點探討各種RhD變異型個體的獻血及輸血策略，為稀有血液的合理應用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、對2011年3月至2013年6月醫(yī)院送檢的Rh陰性個體，通過詢問輸血史和妊娠史排除沒有免疫史的個體。采用鹽水試管法和間接抗人球試驗(IAT)排除血清學試驗常規(guī)試驗陽性的個體。對孕婦的流產(chǎn)史及生育

2、史進行分類，研究流產(chǎn)史及生育史對抗-D產(chǎn)生的影響。
　　2、采用微柱凝膠法篩查抗體，并通過譜細胞進行抗體鑒定，確認抗體特異性。檢測這些樣本的Rh表型，包括D、C、c、E和e抗原。
　　3、采用序列特異性引物PCR(PCR-SSP)技術及DNA序列分析技術，分析樣本的RHD基因。人類紅細胞RHD陰性鑒定基因檢測試劑盒可檢測的基因型包括RhD陽性、RhD陰性、RhD-CE(2-9)-D、DVa(Hus)、DVIⅢ型、弱D15型和

3、DEL RHD1227A。
　　結果：
　　1、本研究觀察有免疫史RhD陰性個體共計336例。其中22例有輸血史的個體均為醫(yī)院在輸血前檢查時發(fā)現(xiàn)抗體篩選陽性的送檢標本樣本，對其進行抗體鑒定試驗確定抗體特異性均為抗-D。通過詢問病史患者都是以往輸用過RhD陽性血液或不能明確所輸用血液具體種類的個體。314例有過既往妊娠史的Rh陰性孕婦中產(chǎn)生抗-D46例，其中G2P0孕婦96例，產(chǎn)生抗-D個體4例，陽性率4.2％;G2P1孕婦4

4、1例，產(chǎn)生抗-D個體6例，陽性率14.6％; G3P0孕婦125例，產(chǎn)生抗-D個體10例，陽性率8.0％;G3P1孕婦38例，產(chǎn)生抗-D個體14例，陽性率36.8％;妊娠超過三次的孕婦38例，產(chǎn)生抗-D個體14例，陽性率36.8％。
　　2、通過DiaClon Rh-Subgroups+k卡測得對336例IAT陰性標本進行Rh表型鑒定。Ccee的個體為185例(55.06％)，Ccee個體119例(35.42％)，CCee個體14

5、例(4.17％)，ccEe個體11例(3.27％)，CcEe個體7例(2.08％)。
　　3、通過DiaClon Rh-Subgroups+k卡測得68例產(chǎn)生抗-D的RhD陰性個體中，Rh表型為ccee的個體為56例(82.3％)，Ccee個體5例(7.4％)，CCee個體4例(5.9％)，ccEe個體2例(2.9％)，CcEe個體1例(1.5％)。其中表型為ccee的個體產(chǎn)生抗-D的比例最高，達82.3％。
　　4、通過人

6、類紅細胞RHD陰性鑒定基因檢測試劑盒對336份樣品進行檢測，發(fā)現(xiàn)其中249例(74.1％)個體完全缺失RHD基因，168例(20.2％)個體攜帶RHD1227A等位基因，19例(5.6％)攜帶RHD-CE(2-9)-D融合基因。
　　5、68例RHD1227A個體Rh表型為ccee的個體為0例，Ccee個體56例(82.4％)，CCee個體8例(14.2％)，ccEe個體1例(1.8％)，CcEe個體3例(5.36％)。
　

7、　6、抗體鑒定確定產(chǎn)生IgG抗-D的個體68例，其中63例(92.6％)完全缺失RHD基因，5例(7.4％)攜帶RHD-CE(2-9)-D融合基因，攜帶RHD1227A等位基因未檢出產(chǎn)生抗-D的個體。產(chǎn)生抗體的基因型均為完全缺失RHD基因和RHD-CE(2-9)-D融合基因個體，DEL RHD1227A個體沒有產(chǎn)生抗-D。
　　結論：
　　血清學確認RhD陰性個體的RHD基因型具有多態(tài)性，北京地區(qū)主要以RHD基因缺失為主，其