Eg5蛋白及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中表達及功能研究.pdf

1、目的：我們旨在研究驅(qū)動蛋白 Eg5在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中表達及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine（STLC）對神經(jīng)母細(xì)胞瘤不同細(xì)胞的誘導(dǎo)功能作用。
　　方法：通過免疫熒光及western blot、流式細(xì)胞術(shù)檢測Eg5蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤（組織及細(xì)胞）中的表達水平；通過相差顯微鏡觀察STLC對細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響；采用CCK-8法檢測STLC對細(xì)胞增殖影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測STLC對細(xì)胞周期的影響；以流式細(xì)胞術(shù)及western b

2、lot檢測經(jīng)STLC誘導(dǎo)后細(xì)胞蛋白表達變化；并經(jīng)DAPI實驗觀察STLC對細(xì)胞核形態(tài)變化的影響；最后，通過采用FISH法檢測STLC對原癌基因 MYCN擴增的影響，免疫熒光法觀察紡錘絲變化等實驗，初步研究誘導(dǎo)機制。
　　結(jié)果：1.通過免疫熒光及western blot、流式細(xì)胞術(shù)等實驗顯示Eg5蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞株中穩(wěn)定表達。2.以Eg5蛋白靶向抑制劑對不同神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后，細(xì)胞胞體形態(tài)增大，突出于水平面，細(xì)胞核增

3、大，細(xì)胞增殖抑制明顯；CCK-8細(xì)胞凋亡檢測見細(xì)胞增殖抑制明顯；流式細(xì)胞儀檢測示在STLC誘導(dǎo)后，細(xì)胞凋亡增多。細(xì)胞周期抑制于G2/M，細(xì)胞核分裂停止；western blot、流式細(xì)胞術(shù)檢測可見在STLC誘導(dǎo)之后，Eg5蛋白表達減少；DAPI實驗顯示細(xì)胞核增大明顯，后期出現(xiàn)核碎裂等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象；FISH檢測見MYCN基因擴增未見明顯變化。
　　結(jié)論：神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中均穩(wěn)定表達 Eg5蛋白，其靶向抑制劑S-Trityl-L