基于基因組改組的醬油釀造米曲霉分子育種研究.pdf

1、醬油是一種營養(yǎng)豐富、色澤和風(fēng)味獨(dú)特的調(diào)味品。米曲霉滬釀3.042是醬油釀造中應(yīng)用最廣泛的菌種，其產(chǎn)蛋白酶活力，特別是產(chǎn)中性蛋白酶活力，影響到原料中蛋白質(zhì)向氨基酸的轉(zhuǎn)化，是醬油生產(chǎn)的核心因素。目前，我國醬油釀造的原料利用率總體水平不高，這不僅極大地浪費(fèi)了資源，而且也限制了醬油品質(zhì)的提高。因此，通過改良菌種，提高成品曲酶活是醬油實際生產(chǎn)中一個永恒的課題，這類研究對生產(chǎn)具有很重要的意義。 本研究通過對滬釀米曲霉3.042孢子進(jìn)行原生質(zhì)

2、體的制備，用紫外線-LiCl,NTG復(fù)合誘變，獲得8株中性蛋白酶活力達(dá)到6000 U/g(干基)以上的突變株群，構(gòu)建成后續(xù)基因組改組育種的突變文庫?；诨蚪M改組(Genome shuffiing)多親株、多輪改組的特點，結(jié)合原生質(zhì)體雙滅活的篩選方法，將8株突變高產(chǎn)株分組通過紫外滅活(15 w，10 cm，15 min)和熱滅活(85℃，5 min)，第一輪多親株P(guān)EG介導(dǎo)融合，進(jìn)行基因組改組育種，然后將融合高產(chǎn)株同樣進(jìn)行第二輪多親株。

3、PEG介導(dǎo)融合，兩次融合后共獲得4株性蛋白酶酶活提高到7000 U/g(干基)以上的融合株，其中最高產(chǎn)株較原始出發(fā)菌株產(chǎn)中性蛋白酶活力提高76％，初步證明了基因組改組技術(shù)在米曲霉育種上的可行性。 同時建立了用于中性蛋白酶高活力誘變株快速篩選的鈣黃綠素藍(lán)-銅配合體系。在pH7.2磷酸鹽緩沖體系，1×10<'-6>mol·L<'-1>鈣黃綠素藍(lán)-Cu<'2+>，0.1g·L<'-1>蛋白底物條件下可以用于蛋白酶活力測定及實時在線檢測