杜氏鹽藻甘油合成代謝調(diào)控的研究.pdf

1、本文系統(tǒng)進行了氮源、碳源、磷源、鹽濃度對杜氏鹽藻甘油代謝調(diào)控的影響；葡萄糖、NaCl對鹽藻中3-磷酸甘油脫氫酶活性的影響；3-磷酸甘油脫氫酶提取和純化以及動植物抽提液對鹽藻固體平板生長影響的研究。 利用本實驗室分離純化得到的無菌藻株A1研究影響杜氏鹽藻合成甘油的各種因子，如氮源、碳源、磷源、鹽濃度等。氮源中尿素對鹽藻單個細胞甘油積累量的影響最大，當鹽藻培養(yǎng)至6d時，添加尿素培養(yǎng)液中甘油積累量為25.81 pg/cell，較添加K

2、NO<,3>培養(yǎng)液中甘油積累量高出52.45％。鹽藻單個細胞甘油含量隨著磷酸二氫鉀濃度的增加而上升，0.65g/L 的磷酸鹽對提高鹽藻單個細胞甘油含量的作用最明顯，達到17.99 pg/cell，比濃度為0.01 g/L時的甘油累積量高出39.24％。碳源中葡萄糖對鹽藻細胞內(nèi)甘油含量積累的促進作用最明顯，15g/L的葡萄糖效果最佳；當葡萄糖和NaCl以不同的濃度組合添加時，0.5 mol/L NaCl，和15g/L 葡萄糖的組合對鹽藻的

3、甘油積累的促進作用最為明顯，鹽藻培養(yǎng)至第6d時，單個細胞甘油含量達到最大值25.28 pg/cell，較對照提高了124.32％。 葡萄糖對鹽藻細胞內(nèi)甘油積累有顯著促進作用，在0～15g/L 范圍內(nèi)葡萄糖的濃度與胞內(nèi)甘油積累顯著相關(y=1.2349x+21.429，R<'2>=0.9965)，葡萄糖濃度達到15g/L時，胞內(nèi)甘油積累量達到最高值40.13μg/mL，是對照的2.06倍。葡萄糖對鹽藻細胞內(nèi)總蛋白、3-磷酸甘油脫氫

4、酶(GPDH)酶活和比活都有顯著影響，這些值在10～15g/L之間產(chǎn)生較大的變化，但變化幅度與葡萄糖的濃度變化不成比例，在15g/L葡萄糖時這3個值達到最大值，分別是對照的4.384、1.354、3.229倍。數(shù)據(jù)顯示葡萄糖濃度在15g/L 時細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量增加不多，但GPDH酶活和比活卻大幅度增加。 當NaCl濃度在0.1～2.0mol/L時，單個細胞內(nèi)的甘油積累量、GPDH酶活及比活均隨NaCl濃度的增加而增加，但繼續(xù)提高

5、NaCl濃度，各值卻反而降低，當NaCI濃度為2.0mol/L時以上各值均達到最大，甘油積累量、GPDH酶活及比活分別為3.30pg/cell，0.24μU/cell及9.02，分別是對照的1.38、3.00及4.93倍。與此同時，平均每個細胞蛋白質(zhì)含量卻隨著NaCl的增加而降低，當NaCl濃度為2.5mol/L時，蛋白質(zhì)含量為21.59pg/cell，僅為對照的51％。 離心收集培養(yǎng)12d的藻細胞，冰浴超聲破碎，獲得粗提液；經(jīng)

6、2次PEG分級，采用DEAE Sepharose Fast Flow柱純化蛋白；經(jīng)0～0.5mol/L NaCl梯度洗脫后，在2個不同NaCl濃度的藻液樣品中分別洗脫出2個峰具有GPDH活性，2.0mol/L NaCl濃度樣品的GPDH經(jīng)DEAE純化后，2個峰所對應的各項值較0.5mol/L NaCl濃度樣品的值均有大幅度提高，2.0mol/L NaCl濃度樣品的第1峰的總蛋白、總酶活及比酶活分別是0.5mol/L NaCl濃度樣品的4

7、.23、4.50和1.06倍，而第2峰對應的總蛋白、總酶活及比酶活分別是0.5mol/L NaCl濃度樣品的13.80、69.90和5.07倍，與第1峰相比各項值大幅度增加。數(shù)據(jù)顯示第2峰中可能存在顯著受到高濃度NaCl誘導的“滲透調(diào)節(jié)”型GPDH同功酶。培養(yǎng)至30d時，在添加魚湯提取物的平板上，形成了較好的單藻落，藻落較大，顏色呈深綠色，而對照平板上的藻落小，呈淺綠色。通過計算植板率，發(fā)現(xiàn)隨著魚湯提取物濃度的增加，植板率越高，8％魚湯