ABCG1啟動子多態(tài)性對轉(zhuǎn)錄活性的影響及其與冠心病的相關(guān)性.pdf

1、【研究背景】：
　　冠心?。╟oronary artery disease, CAD）是危害人類健康的主要疾病，其發(fā)病率和死亡率居所有疾病之首。CAD的發(fā)生主要是由于冠狀動脈粥樣硬化所致，受遺傳因素和環(huán)境因素影響，其中遺傳因素起主導(dǎo)作用。高膽固醇是CAD的獨立危險因素之一，其在細胞中的蓄積與膽固醇的細胞代謝調(diào)控有關(guān)。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1（ ATP-binding cassette transporter G1, ABCG1）

2、是三磷酸結(jié)合盒（ATP-binding cassette, ABC）轉(zhuǎn)運體超家族中的成員之一，參與細胞內(nèi)膽固醇和磷脂向高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）轉(zhuǎn)運的過程，從而避免膽固醇嚴重沉積于外周細胞，在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運（ reverse cholesterol transport, RCT）中起重要作用。既往研究顯示ABCG1基因內(nèi)或啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性位點（si

3、ngle nucleotide polymorphisms, SNPs）與CAD的易感性有關(guān)。啟動子區(qū)的SNPs能導(dǎo)致ABCG1的表達水平改變，從而導(dǎo)致個體對CAD易感性的差異，致使啟動子活性下降的SNPs降低CAD的發(fā)病風(fēng)險，其主要機制可能是誘導(dǎo)巨噬細胞的凋亡所致。然而ABCG1存在多個轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)（promoter region A, B, C等），對于啟動子A中的SNPs是否與CAD的易感性有關(guān)也有研究報道，且與早發(fā)心肌梗死和冠脈病

4、變血管數(shù)相關(guān)。但rs1378577是否影響ABCG1啟動子活性，以及在啟動子A區(qū)是否存在其它與CAD易感性有關(guān)的SNPs尚不清楚，本研究擬通過Sanger測序和雙螢光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定ABCG1啟動子A區(qū)與CAD易感性相關(guān)的SNPs和單倍型，進一步揭示ABCG1參與CAD發(fā)生發(fā)展的分子遺傳機制。
　　【研究目的】：
　　1.探討ABCG1基因啟動子A近轉(zhuǎn)錄啟始位點區(qū)域的多態(tài)性對基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　2.探討 AB

5、CG1啟動子 A近轉(zhuǎn)錄啟始位點區(qū)域的多態(tài)性與中國南方漢族人群CAD易感性的關(guān)系。
　　【研究方法】：
　　1.采用病例-對照研究，收集217例經(jīng)冠脈造影證實的CAD患者和142例對照者的血樣，提取基因組DNA；同時收集研究對象的詳細臨床資料。
　　2.對ABCG1啟動子A轉(zhuǎn)錄啟始位點上游約1000 bp核苷酸序列進行PCR擴增和Sanger法測序，計算SNPs位點基因型和等位基因型在各組中的頻率，并對序列進行進化分析，

6、分析SNPs組成的單倍型及單倍型頻率分布。
　　3.構(gòu)建ABCG1的組成型和突變型啟動子單倍型螢光素酶報告基因載體，轉(zhuǎn)染Hela和HCAEC，利用雙螢光素酶報告基因系統(tǒng)檢測不同單倍型的螢光素酶活性。
　　4.統(tǒng)計分析：比較分析組或亞組間SNPs等位基因頻率、基因型頻率及其所形成的單倍型頻率差異。
　　【結(jié)果】：
　　1.在ABCG1基因啟動子A轉(zhuǎn)錄啟始位點上游約1000 bp序列中發(fā)現(xiàn)3個多態(tài)性位點[-384（A

7、/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]，可形成ACG、GAT和GCG3種單倍型，3個SNPs間強連鎖不平衡，Tajima’s D=2.655（P＜0.001）。
　　2.三種組成型單倍型（ACG、GAT和 GCG）的轉(zhuǎn)錄活性無顯著性差異。將GAT進行點突變，得到兩種突變單倍型GAG和GCT，GAG單倍型的轉(zhuǎn)錄活性較組成型單倍型的轉(zhuǎn)錄活性升高約2倍，而GCT單倍型的轉(zhuǎn)錄活性與組成型單倍型無顯著差異。
　　3. ABC

8、G1啟動子A區(qū)SNP位點[-384（A/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]的等位基因頻率、基因型頻率及其形成的單倍型的頻率在CAD和對照組中分布無統(tǒng)計學(xué)差異，與早發(fā) CAD及 CAD病變數(shù)量的嚴重程度亦無顯著相關(guān)性。
　　【結(jié)論】：
　　1. ABCG1啟動子A區(qū)的3個SNPs[-384（A/G）、-204（A/C）和-134（T/G）]形成的三種組成型單倍型的啟動子活性沒有顯著差異。
　　2. ABCG1