自噬對炎性微環(huán)境下ATDC5細胞軟骨表型表達的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 IL-1β對ATDC5細胞增殖、軟骨表型及自噬的影響
　　目的：探討白細胞介素-1β（IL-1β）模擬炎性微環(huán)境下對軟骨細胞株ATDC5細胞增殖及軟骨表型的影響，以及自噬、凋亡作用。
　　方法：體外培養(yǎng)ATDC5細胞，以不同濃度IL-1β（0、10、20、30、40、60ng/ml）刺激48h和同一濃度（30ng/ml）IL-1β刺激不同時間（0、6、12、24、36、4

2、8、72h）；采用CCK-8法檢測細胞增殖情況、轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）、Western bolt檢測軟骨相關(guān)指標Col2a、Sox9及自噬相關(guān)指標LC3、Beclin-1的mRNA和蛋白水平。
　　結(jié)果：CCK-8檢測顯示IL-1β可顯著促進細胞增殖，并具有時間依賴性；在IL-1β作用下ATDC5細胞軟骨指標Col2a和Sox9表達下調(diào)，而自噬相關(guān)指標LC3和Beclin-1表達上調(diào)，并于24h時達到最高值。

3、　　結(jié)論：在炎性環(huán)境中，不利于ATDC5表達軟骨指標，而在干預(yù)早期(24h)發(fā)生的自噬現(xiàn)象能促進AT D C5細胞軟骨指標的表達。
　　第二部分 Wnt/β-catenin通路與NF-κB通路共調(diào)節(jié)在炎性環(huán)境下ATDC5細胞軟骨表型表達的作用
　　目的：探討Wnt通路調(diào)控對炎性環(huán)境下ATDC5細胞軟骨表型表達的影響，分析Wnt通路和 NF-κB通路的相互作用關(guān)系，為維持炎性環(huán)境下軟骨表型和臨床治療關(guān)節(jié)軟骨損傷提供一種可行方案

4、
　　方法:體外培養(yǎng)ATDC5細胞，以不同濃度IL-1β（0、10、20、30、40、60ng/ml）、不同濃度LiCl（0、3、6、12、18、24mM）刺激48h以及第一組予LiCl（6、12mM）刺激，第二組予IL-1β30 ng/ml刺激，第三組予IL-1β30 ng/ml并LiCl（6、12mM）同時刺激，以正常培養(yǎng)組為空白對照分別培養(yǎng)48h；采用轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）、Western bolt檢測軟骨相關(guān)

5、指標Col2a、Sox9的mRNA和蛋白水平及Western bolt檢測Wnt/β-catenin通路與NF-κB通路相關(guān)基因的蛋白表達。
　　結(jié)果:IL-1β組軟骨相關(guān)指標Col2a、Sox9表達減弱而LiCl組表達升高，Western bolt結(jié)果顯示IL-1β+LiCl組較單純IL-1β組NF-κB通路相關(guān)蛋白表達升高而β-catenin蛋白表達減弱，且磷酸化β-catenin蛋白表達稍增高，c-myc、GSK-3β及其磷