芝麻素抑制TLR4信號(hào)活化減輕脂多糖-D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭.pdf

1、目的：研究芝麻素對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）/D-半乳糖胺(D-galactosamine， D-GalN)誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭（ fulminnant hepatic failure, FHF）的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，Balb/c小鼠隨機(jī)分為6組，包括空白對(duì)照組、芝麻素對(duì)照組、模型組、芝麻素低劑量干預(yù)組、芝麻素中劑量干預(yù)組和芝麻素高劑量干預(yù)組。以腹腔注射LPS

2、（50μg/kg）/D-GalN（800 mg/kg）建立小鼠FHF模型；分別以10，30，100 mg/kg芝麻素每8 h一次，共3次給小鼠灌胃，隨后腹腔注射LPS/D-GalN，作為低、中、高劑量芝麻素干預(yù)組；以100 mg/kg芝麻素單獨(dú)給藥作為藥物對(duì)照組。分別觀察48 h小鼠生存率，檢測(cè)血清中ALT和AST活性，HE染色，TUNEL（transferase-mediated deoxyuridine triphosphate n

3、ick-end labeling）和免疫組織化學(xué)（ immunohistochemistry， IHC）檢測(cè)Active-Caspase-3評(píng)價(jià)肝臟組織病理?yè)p傷程度和凋亡。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）檢測(cè)血清和肝組織中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)；定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（quantitative reverse tr

4、anscription PCR, QRT-PCR）測(cè)定肝組織中TNF-α mRNA的表達(dá);Western blot檢測(cè)肝臟髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase, MPO)、細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（endothelial cell adhesion molecule-1，ECAM-1）、toll樣受體4（toll like rec

5、eptor4，TLR4）、p-IκB、p-p38的表達(dá)。
　　2.在體外實(shí)驗(yàn)，小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞給予芝麻素處理30 min后，再用LPS刺激6 h。應(yīng)用ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α水平；熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)兩種轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性；流式細(xì)胞術(shù)分析巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.芝麻素劑量依賴(lài)性地改善LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠存活率和降低血清中ALT和AS

6、T活性。
　　2.芝麻素明顯減輕LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟病理?yè)p傷和凋亡。HE顯示，芝麻素顯著減輕LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟壞死面積、組織結(jié)構(gòu)破壞及出血程度。TUNEL染色結(jié)果表明，芝麻素明顯減少LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞凋亡。IHC檢測(cè)肝組織切片中Active-Caspase-3的表達(dá)結(jié)果表明，芝麻素明顯抑制LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟中Active-Caspase-3表達(dá)。
　　3.芝麻素

7、能明顯減少LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟中性粒細(xì)胞的募集和細(xì)胞粘附分子的表達(dá)。
　　4.芝麻素能明顯抑制 LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞和小鼠血清及肝臟中TNF-α的表達(dá)。
　　5.小鼠和巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，芝麻素抑制LPS誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB活化，p38 MAPK和NF-κB信號(hào)激活及TLR4的表達(dá)。
　　結(jié)論：芝麻素對(duì)脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭具有保護(hù)作用。這種保護(hù)作用可能與下調(diào)巨噬細(xì)胞表面T