黃芩苷納米脂質(zhì)體抑制TLR4信號通路減輕小鼠非酒精性脂肪肝病.pdf

1、背景：非酒精性脂肪肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性、脂肪貯積和炎癥反應(yīng)為主要特征，并且無過量飲酒史的慢性肝臟代謝性疾病。NAFLD從單純性脂肪肝、可發(fā)展成為非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）、肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌。NAFLD的發(fā)病率、死亡率逐年升高，并呈低齡化發(fā)病趨勢。盡管目前對NAFLD發(fā)病機(jī)制的研

2、究取得了一定的進(jìn)展，但仍然缺乏有效的治療藥物。因此，尋找對NAFLD有效的治療藥物就顯得尤其關(guān)鍵。黃芩苷（Baicalin,BA）是一種具有抗炎、抗氧化、調(diào)血脂、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用的黃酮類化合物。研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷對多種原因引起的肝臟損傷有一定的保護(hù)作用。
　　目的：探討黃芩苷及其納米脂質(zhì)體對小鼠非酒精性脂肪肝病的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.黃芩苷納米脂質(zhì)體的制備及表征鑒定
　　以卵磷脂、膽固

3、醇為膜材料，采用薄膜分散法制備黃芩苷納米脂質(zhì)體，并考察其微觀形態(tài)、粒徑分布、多分散系數(shù)、Zeta電位值、包封率和載藥量。
　　2.黃芩苷納米脂質(zhì)體對NAFLD小鼠的保護(hù)作用
　　將雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為6組：空白對照組（Control組）、黃芩苷組（BA組）、黃芩苷納米脂質(zhì)體組（BA-NL組）、模型組（MCD組）、黃芩苷給藥組（MCD-BA組）、黃芩苷納米脂質(zhì)體給藥組（MCD-BA-NL組）。模型組及給藥組連續(xù)MC

4、D飼料喂養(yǎng)5周建立NAFLD模型，BA、BA-NL分別于造模第二周開始按50mg/kg/d灌胃給藥。觀察小鼠一般情況，測定小鼠體重及肝重；全自動生化儀測定各組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase,AST）和甘油三酯（triglyceride,TG）活性；肝臟大體形態(tài)和HE染色觀察肝臟病理學(xué)改變情況，油紅O染色觀察肝細(xì)胞

5、脂肪變性程度，Masson染色觀察肝臟纖維化程度，并依照NAFLD組織學(xué)評分系統(tǒng)對肝臟脂肪變性、炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞氣球樣變性及肝纖維化程度進(jìn)行評分；TUNEL檢測肝細(xì)胞凋亡情況。
　　3.BA-NL對NAFLD小鼠TLR4信號激活的的炎癥反應(yīng)的影響
　　免疫熒光染色檢測肝臟組織中巨噬細(xì)胞（F4/80）和中性粒細(xì)胞（Ly6G）募集和浸潤情況；熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測血清及肝臟組織中炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6、TNF-α、ICA

6、M、ECAM、ELAM、CCL2和CXCL2的mRNA表達(dá)；WB分析肝組織中TLR4、MyD88、P-P65、P-P38蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.制備的黃芩苷納米脂質(zhì)體為圓球形或近球形，且分散性較好，平均粒徑為81.41nm，多分散系數(shù)為0.31，Zeta電位為-13.9±5.74mV，包封率為81.10％，載藥量為6.9％。
　　2.與模型組相比，MCD-BA組、MCD-BA-NL組小鼠血清ALT、AST活性顯

7、著降低（P＜0.01）；小鼠肝損傷、肝細(xì)胞氣球樣變性及纖維化程度明顯減輕，肝細(xì)胞凋亡顯著減少，且BA-NL對MCD誘導(dǎo)的上述損傷的保護(hù)作用較BA好。此外，與MCD飼料誘導(dǎo)的模型組相比，MCD-BA組的肝指數(shù)、血清TG含量和脂肪變性程度均無顯著差異，而MCD-BA-NL組的肝指數(shù)顯著升高（P＜0.01）、血清TG含量明顯降低（P＜0.05），肝臟脂肪變性程度顯著減輕（P＜0.05）。
　　3.與對照組相比，模型組小鼠TLR4相關(guān)信號

8、上調(diào)，炎性細(xì)胞浸潤增加。給予BA、BA-NL處理后，小鼠肝臟巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞陽性表達(dá)數(shù)量較MCD組顯著減少，肝組織中細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）、粘附分子（ICAM、ECAM、ELAM）和趨化因子（CCL2、CXCL2）的mRNA表達(dá)均明顯減少，肝組織中TLR4、NF-κB、P-P65、P-P38蛋白表達(dá)下降，且BA-NL對NAFLD小鼠肝臟中TLR4信號激活的的炎癥反應(yīng)抑制作用強(qiáng)于BA。
　　結(jié)論：黃芩苷及其