辛夷脂素及其制劑的藥代動力學(xué)和組織分布研究.pdf

1、目的：課題組前期從傳統(tǒng)中藥入手，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中藥辛夷提取物辛夷脂素對肺動脈血管具有明顯的舒張作用，具有潛在的肺動脈高壓（pulmonary hypertension， PH）治療作用。本研究旨在此基礎(chǔ)上研發(fā)一種具有緩釋作用的肺靶向PH治療候選藥物。（1）建立血液等生物樣本中辛夷脂素的含量測定方法，了解灌胃和注射給藥后藥物的吸收、分布、代謝等規(guī)律，初步對辛夷脂素在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)特性和組織分布進(jìn)行評價；（2）通過優(yōu)化制備工藝，建立質(zhì)

2、量評價標(biāo)準(zhǔn)，制備具有緩釋作用的肺靶向辛夷脂素微球制劑；（3）對載藥微球在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)和組織分布進(jìn)行分析，對靶向性、緩釋效果和機(jī)體毒性等方面做出評價。
　　方法：本研究采用高效液相色譜分析方法，建立了辛夷脂素生物樣本檢測方法，使用DAS2.0藥代動力學(xué)軟件，對灌胃和尾靜脈注射兩種給藥途徑后，辛夷脂素在SD大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)特性分別進(jìn)行了分析，擬合繪制出兩種不同給藥途徑的血藥濃度-時間曲線圖；采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備辛夷脂素微

3、球，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對制劑工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳制備方法，利用高效液相色譜技術(shù)對微球的包封率和載藥量進(jìn)行檢測，使用掃描電鏡、Zata電位分析儀等對微球的特征性能進(jìn)行評價，利用高效液相色譜儀分析技術(shù)、活體成像技術(shù)以及激光共聚焦掃描顯微鏡對制劑的組織靶向性和緩釋效果進(jìn)行評價，明確該制劑在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)和組織分布情況。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜分析方法，選用甲醇作為血液和組織中藥物提取的沉淀劑，以甲醇-水（58:42

4、）作為流動相，流速1 mL/min，柱溫25°C，進(jìn)樣量20μL為分析條件，建立了一種專屬性良好、準(zhǔn)確度高且線性范圍合理的辛夷脂素生物樣本檢測方法。實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠灌胃給藥（50 mg/kg）和尾靜脈注射給藥（20 mg/kg）兩種給藥方式，給藥后藥物均能被迅速吸收。灌胃后約1h血藥濃度達(dá)到第一次高峰，爾后逐漸下降，在290±24.49 min達(dá)到最大血藥濃度，峰濃度Cmax為464.38±152.11 ng/mL，藥物半衰期為106.

5、39±84.93 min；注射給藥后峰濃度在20±1.28 min出現(xiàn)，峰濃度為2049.0±723.43 ng/mL，半衰期為80.75±36.19 min，8 h內(nèi)均代謝至最低檢測限以下。組織分布研究發(fā)現(xiàn)，通過上述兩種途徑給藥后，在30 min、2 h、6 h和8 h等4個取樣時間點(diǎn)中，除口服給藥后30 min腎組織未能檢測到藥物外，其余時間在心、肝、肺和腎組織均可以檢測到辛夷脂素，但肺組織各時間點(diǎn)的濃度均較其余組織低。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采

6、用乳化-溶劑揮發(fā)法制備了辛夷脂素微球，優(yōu)化確定的最佳制備工藝為：PLGA與藥物比例為6:1，PVA濃度為2％，乳化時間為40 s，乳化劑與油相體積比為10:2，制備所得微球呈蜂窩圓球狀，約64.2%的微球粒徑分布在10.17±3.08μm左右，Zeta電位為-4.49 mV，平均密度為0.31±0.02 g/cm3，包封率和載藥量分別為76.47%和15.65%。在PBS緩沖鹽溶液（pH=6.8）中15天的釋放度為7.62%，但在緩沖鹽

7、溶液中加入20%的甲醇溶液后，其72 h的釋放度可達(dá)到80%。載藥微球組織分布實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)鼻吸入或尾靜脈注射給藥1 h后，藥物能迅速富集于肺組織。經(jīng)鼻吸入30 min后肺組織平均濃度為1050.118±56.57 ng/mL，8 h后達(dá)到峰濃度24869.14±36.87 ng/mL，24 h濃度仍在2009.88±96.53 ng/mL，維持在較高濃度水平；尾靜脈注射30 min后肺組織平均濃度為3364.51±49.51 ng/mL

8、，8 h達(dá)到峰濃度23991.06±77.95 ng/mL，24 h濃度高達(dá)10660.74±86.57 ng/mL，48 h仍維持在1062.59±33.47 ng/mL?；铙w成像顯示，兩種方式給藥后載藥微球都可達(dá)肺部組織，實(shí)現(xiàn)了靶向給藥目的，進(jìn)一步通過激光共聚焦掃描顯微鏡對組織切片觀察發(fā)現(xiàn)，該制劑具有明顯的肺靶向性和緩慢降解釋放特性。兩種給藥方法所取肺組織切片HE染色，與正常肺組織對比，組織未見明顯炎性病變，未發(fā)現(xiàn)有顯著組織異樣變化