牛黃上清片的比較藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布研究.pdf

1、牛黃上清片是中醫(yī)治療實(shí)熱證的經(jīng)典方劑，具有清熱瀉火，散風(fēng)止痛的功效，臨床上主要用于頭痛眩暈，目赤耳鳴，咽喉腫痛，口舌生瘡，牙齦腫痛，大便燥結(jié)。主要是由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、川芎、梔子、黃連、黃柏、黃芩、大黃、連翹、赤芍、當(dāng)歸、地黃、桔梗、甘草、石膏以及冰片十九味中草藥按照“君、臣、佐、使”原則配伍制成。其在生物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及主要活性成分在體內(nèi)的分布及代謝規(guī)律目前還未有文獻(xiàn)報(bào)道，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確。為此，本課題對(duì)其藥代動(dòng)

2、力學(xué)進(jìn)行比較研究，并分析其在生物體內(nèi)的分布情況和代謝途徑，為闡明牛黃上清片的作用機(jī)理和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定基礎(chǔ)。
　　首次采用HPLC法，以Inertsil?ODS-3 column(150 mm×4.6 mm,5 um,GL Scie nce,Japa n)為色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.2％磷酸（80:20）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10μL；進(jìn)樣時(shí)間：20 min；內(nèi)標(biāo)：1，8-二

3、羥基蒽醌。對(duì)復(fù)方制劑牛黃上清片，單味藥材大黃及單體化合物大黃酸在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，比較大黃酸在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在相當(dāng)劑量下牛黃上清片中大黃酸的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與大黃提取物及大黃酸單體相比，均有顯著性差異（P＜0.05）。牛黃上清片中大黃酸的血藥濃度Cmax（NHSQA：2.462 mg/L;NHSQ B：1.903 mg/L;NHSQC：2.922 mg/L）遠(yuǎn)大于大黃提取物中大黃酸的Cmax（1.116

4、mg/L）及大黃酸對(duì)照品的Cmax（0.662 mg/L），而牛黃上清片中大黃酸達(dá)到最大血藥濃度的時(shí)間Tmax（NHSQA：0.236 h;NHSQB：0.333 h;NHSQC：0.264 h）又比大黃提取物Tmax（0.542 h）及大黃酸對(duì)照品Tmax（0.958 h）的短。此外，牛黃上清片在大鼠體內(nèi)的AUC值（NHSQA：7.105 mg/L*h；NHSQB：8.616 mg/L*h；NHSQC：8.385 mg/L*h）遠(yuǎn)大于

5、大黃提取物的AUC（4.518 mg/L*h）和大黃酸的AUC（2.395 mg/L*h）。
　　本課題首次采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)在正、負(fù)離子兩種模式下對(duì)牛黃上清片體外提取物及主要活性成分在大鼠體內(nèi)（腦、心、肝臟、腎臟、血液、尿液）的吸收分布和代謝進(jìn)行研究。結(jié)合Peak View?軟件分析鑒定出211個(gè)體外提取物，135個(gè)體內(nèi)原型成分和154個(gè)代謝物產(chǎn)物。其中體外提取物中的43個(gè)是根據(jù)對(duì)照品完全鑒定，其余的依據(jù)

6、文獻(xiàn)和裂解規(guī)律為暫時(shí)鑒定。135個(gè)原型成分中，血漿樣品中91個(gè)，腦組織中31個(gè)，心組織中50個(gè)，肝臟組織中55個(gè)，腎臟組織中52個(gè)以及尿樣中93個(gè)。此外，代謝物也分布于大鼠的各個(gè)組織，其中有五個(gè)代謝產(chǎn)物（M50,M79,M115,M128和M154）是首次發(fā)現(xiàn)的目前未有文獻(xiàn)報(bào)道的新代謝物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，牛黃上清片的主要活性成分及代謝物存在于生物的各組織中，且代謝主要以Ⅱ相代謝反應(yīng)（葡萄糖醛酸化、甲基化、硫酸酯化）為主。本實(shí)驗(yàn)比較全面的