PLA2G16磷脂酶通過(guò)活化MAPK通路促進(jìn)骨肉瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移及抗藥性.pdf

1、目的：
　　闡明PLA2G16基因的表達(dá)與人骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，明確PLA2G16磷脂酶在調(diào)節(jié)骨肉瘤轉(zhuǎn)移與惡化過(guò)程中的作用機(jī)理;探索PLA2G16作為骨肉瘤臨床治療標(biāo)志物的潛在價(jià)值，為確立PLA2G16作為骨肉瘤診斷與治療的新靶點(diǎn)提供依據(jù)。
　　方法：
　　1)逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒包裝系統(tǒng)建立PLA2G16穩(wěn)定高表達(dá)或敲低的骨肉瘤細(xì)胞系，利用這些細(xì)胞系分析PLA2G16的高表達(dá)或敲低表達(dá)分別對(duì)細(xì)胞增殖(MTTassa

2、y)、遷移(Wound-healing assay)、侵潤(rùn)(Matrigel Transwell assay)、克隆形成(ColonyFormation)、極性依賴性生長(zhǎng)(Soft agar assay)和藥物敏感性的影響。同時(shí)對(duì)PLA2G16基因進(jìn)行C113S突變使其失去磷脂酶活性，檢測(cè)PLA2G16-C113S對(duì)骨肉瘤細(xì)胞表型的影響。
　　2)利用qRT-PCR及Western bot等技術(shù)探索PLA2G16促進(jìn)骨肉瘤發(fā)展轉(zhuǎn)移

3、的作用機(jī)制。使用小分子抑制劑分別抑制PLA2G16的磷脂酶活性及其靶蛋白的表達(dá)進(jìn)一步證實(shí)PLA2G16是通過(guò)發(fā)揮磷脂酶活性而作用其靶蛋白，進(jìn)而影響骨肉瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移。
　　3)將PLA2G16穩(wěn)定高表達(dá)的細(xì)胞株通過(guò)皮下注射種入裸鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察PLA2G16對(duì)其成瘤率的影響，并通過(guò)Western blot等檢測(cè)PLA2G16及其下游蛋白的表達(dá)。
　　4)采用組織芯片和免疫組化技術(shù)，檢測(cè)骨肉瘤組織中PLA2G16及其靶蛋白的

4、表達(dá);收集骨肉瘤患者的臨床資料分析PLA2G16及其調(diào)控的下游蛋白與骨肉瘤發(fā)生與發(fā)展的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1) PLA2G16磷脂酶的表達(dá)促進(jìn)了骨肉瘤的增殖，克隆形成能力，極性依賴性生長(zhǎng)，侵襲與遷移。
　　2)骨肉瘤細(xì)胞中PLA2G16的表達(dá)降低了其對(duì)傳統(tǒng)化療藥物的敏感性，且這種作用具有時(shí)間和劑量累加效應(yīng)。
　　2) PLA2G16的癌基因功能與其細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)相關(guān)并通過(guò)活化MAPK通路促進(jìn)其發(fā)展轉(zhuǎn)移。