Brg1在正常與疾病狀態(tài)下眼表組織中的表達(dá)與功能研究.pdf

1、背景:Brahma相關(guān)基因1（Brahma-related gene1，Brg1）是染色質(zhì)重塑復(fù)合物SWI/SNF的ATP酶亞基之一，廣泛存在于真核細(xì)胞中。以往的研究表明，Brg1結(jié)合復(fù)合物參與不同類型細(xì)胞的細(xì)胞周期控制、凋亡和細(xì)胞分化。到目前為止，沒有關(guān)于眼表上皮細(xì)胞Brg1表達(dá)以及功能的報道。
　　方法:對小鼠、兔以及人眼表組織的Brg1表達(dá)和定位進(jìn)行免疫熒光染色和蛋白質(zhì)印跡檢測。人角膜上皮細(xì)胞株(HCE)，小鼠角膜上皮細(xì)胞系

2、(TKE2)，小鼠原代培養(yǎng)的角膜上皮細(xì)胞(mCEC)分別在DMEM/F12+10％FBS，KSFM，和CNT-20培養(yǎng)基中培養(yǎng)。兔角膜緣上皮細(xì)胞進(jìn)行克隆培養(yǎng)。采用0.9mM Ca2+，10％FBS或Brg1 siRNA處理TKE2，探討B(tài)rg1在角膜上皮細(xì)胞分化中的作用。另外，對翼狀胬肉組織的Brg1表達(dá)進(jìn)行免疫熒光染色及PCR檢測。
　　結(jié)果:在小鼠出生后第0-7天，角膜上皮未見Brg1表達(dá)，第2周開始在角膜上皮基底層有少量細(xì)胞

3、表達(dá)，第3周見陽性細(xì)胞擴(kuò)展至基底上層，至第4周中央角膜上皮呈全層表達(dá)。角膜緣處均無表達(dá)。Brg1在人角膜緣上皮細(xì)胞基底層無表達(dá)，而在角膜緣上層、外周和中央角膜上皮細(xì)胞全層表達(dá)。在兔角膜緣和角膜組織中，Brg1呈現(xiàn)類似的表達(dá)模式。免疫熒光染色顯示，TKE2細(xì)胞系、HCE細(xì)胞系和mCEC細(xì)胞核中均有Brg1表達(dá)，但在核中的表達(dá)分布不同。兔角膜緣上皮細(xì)胞克隆未見Brg1表達(dá)，而在原代培養(yǎng)的兔角膜緣上皮細(xì)胞和兔中央角膜上皮細(xì)胞中，Brg1均呈核

4、表達(dá)。TKE2在0.9mM Ca2+或10％FBS誘導(dǎo)分化后，細(xì)胞中Brg1表達(dá)水平?jīng)]有明顯改變，但在細(xì)胞核中的分布方式發(fā)生變化。TKE2細(xì)胞轉(zhuǎn)染Brg1 siRNA后，經(jīng)過實(shí)時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，Brg1表達(dá)水平下降，而p63、K14等干細(xì)胞特異性蛋白表達(dá)水平增高，同時與上皮細(xì)胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Klf4表達(dá)水平降低。人及兔正常結(jié)膜組織只在上皮表層有少量Brg1表達(dá)，但翼狀胬肉上皮層全層細(xì)胞高表達(dá)Brg1。
　　結(jié)論:Brg