熊果酸經(jīng)ROCK-PPAR-γ-CXCL16信號通路對ox-LDL誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷的保護作用.pdf

1、目的：復制高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白（High ox-LDL）誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）損傷病理模型，證明熊果酸（UA）經(jīng)ROCK/PPAR-γ/CXCL16信號通路保護血管內(nèi)皮細胞。
　　方法：以HUVECs為受試對象，篩選確定High ox-LDL的最佳造模濃度（24h）。實驗設計為：正常組、High ox-LDL組、UA+High ox-LDL組、ROCK特異性抑制劑（Y27632）組、Y27632+High

2、 ox-LDL組、UA+Y27632+High ox-LDL組、PPAR-γ特異性激活劑（羅格列酮）組、羅格列酮+High ox-LDL組、UA+羅格列酮+High ox-LDL組、PPAR-γ特異性抑制劑（GW9662組）、GW9662+High ox-LDL組、UA+GW9662+High ox-LDL組。采用CCK8法檢測各組細胞的存活率；應用分子生物學技術，檢測不同處理組中ROCK磷酸化水平（p-ROCK/ROCK非磷酸化）以及

3、PPAR-γ、CXCL16在mRNA和蛋白水平的表達，并運用特異性抑制劑/激活劑證明其級聯(lián)關系；Amplite ROS Green法測定細胞內(nèi)ROS含量；并采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計分析。
　　結果：35μg/ml High ox-LDL成功復制損傷模型，此時胞內(nèi)ROS是正常組的2.4倍，p-ROCK/ROCK（非磷酸化）比值升高，CXCL16 mRNA表達上調，PPAR-γmRNA表達顯著降低，且PPAR-γ與CXCL16在蛋

4、白水平的表達與mRNA水平相一致，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。較之模型組，100μM Y27632(1h)可上調PPAR-γ在蛋白水平的表達，100μM Y27632（1h）及100μM羅格列酮（1h）下調CXCL16蛋白水平以及ROS的含量（P<0.05)，20μM GW9662（30 min)卻使CXCL16和ROS表達進一步升高（P<0.05)，即ROCK/PPAR-γ/CXCL16的激活與 High ox-LDL誘導的氧化

5、損傷呈正相關。5、10、20μmol/L UA預孵育16小時，呈劑量依賴性提高受損細胞的存活率（P<0.05），其保護效果小于Y27632及羅格列酮分別和UA共同作用組（P<0.05)，但可被GW9662拮抗（P<0.05)。計算機輔助藥物設計軟件結果顯示，UA的不飽和基團共價氧可以與ROCK的活性位點賴氨酸及酪氨酸殘基通過氫鍵相結合。不同濃度的UA均可降低ROCK的磷酸化水平，提高PPAR-γmRNA和蛋白表達（P<0.05)，降低C

6、XCL16及胞內(nèi)ROS的生成（P<0.05)。UA+Y27632共孵育能上調PPAR-γ表達，下調CXCL16及ROS的生成，較模型組有明顯差異（P<0.05)，相對于分別單用UA及Y27632組卻無變化（P>0.05）；GW9662拮抗UA對 CXCL16以及 ROS的下調，使二者生成均升高（P<0.05）；UA可能通過負調控ROCK/PPAR-γ/CXCL16的激活發(fā)揮抗損傷的作用。
　　結論：35μg/ml的High ox-