霍亂弧菌蛋白質組研究中雙向電泳技術平臺的建立.pdf

1、隨著人類基因組研究計劃的完成，生命科學的研究開始進入后基因組時代。蛋白質組學是在基因組學發(fā)展的基礎上形成的新興學科，主要是從整體水平研究細胞內蛋白質的組成及其活動規(guī)律，涉及對蛋白質特性、蛋白質翻譯后修飾以及蛋白質與蛋白質之間的相互作用研究的廣泛領域。目前，蛋白質組學的研究已經成為21世紀生命科學研究的熱點領域之一。雙向凝膠電泳一次可以分離成千上萬個蛋白質，是蛋白質組學的主要分離技術。 本論文以霍亂弧菌N16961、JS32、D1

2、18、M045、93284等為實驗菌株進行雙向電泳平臺的建立。實驗中采用超聲兼尿素、硫脲、CHAPS、DTT裂解法提取霍亂弧菌全菌蛋白，一向等電聚焦使用固相pH梯度凝膠條(pH4-7，6-11)，膠內重泡脹技術，聚焦總電壓時56kVh-66kVh．用DTT和碘乙酰胺兩步平衡；二向電泳采用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠(12％，1.0mm)；對凝膠進行考馬斯亮藍染色，用ImageScanner光密度掃描儀獲取染色后的2-DE凝膠圖譜。通過