版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:構(gòu)建 HPV16E6過(guò)表達(dá)腺病毒載體,比較 HPV16E6過(guò)表達(dá)組和空白載體組兩組與空白對(duì)照組 Me180細(xì)胞侵襲與遷移能力的大小,以及E-cadherin mRNA、蛋白的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化的狀態(tài),探究HPV16E6對(duì)宮頸癌Me180細(xì)胞侵襲與遷移能力的影響及其機(jī)制。
方法:1.構(gòu)建HPV16E6腺病毒:將HPV16E6基因亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒pHBAd-MCMV-GFP,用EcoR I和BamH I雙酶切判定、運(yùn)
2、用PCR技術(shù)擴(kuò)增并將其產(chǎn)物與 pHBAd-MCMV-GFP結(jié)合并轉(zhuǎn)化大腸桿菌,檢測(cè)序列是否正確,然后取 HPV16E6過(guò)表達(dá)腺病毒載體質(zhì)粒及骨架質(zhì)粒,用LipofiterTM轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)將重組體腺病毒在293A細(xì)胞中的包裝擴(kuò)增純化;2.病毒轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證:將過(guò)表達(dá) HPV16E6腺病毒轉(zhuǎn)染的宮頸癌Me180細(xì)胞,空白腺病毒轉(zhuǎn)染的宮頸癌Me180細(xì)胞,以及未進(jìn)行腺病毒轉(zhuǎn)染的宮頸癌Me180細(xì)胞分成3組:HPV16E6過(guò)表達(dá)組、空白載體組以及
3、空白對(duì)照組,用過(guò)表達(dá)HPV16E6基因的腺病毒及其空白腺病毒載體感染Me180細(xì)胞,36小時(shí)后觀察綠色熒光表達(dá)情況,觀察熒光效果并運(yùn)用 Western-Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3組細(xì)胞中HPV16E6的表達(dá)來(lái)驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效果;3.細(xì)胞遷移與侵襲能力:運(yùn)用Traswell遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)HPV16E6基因?qū)m頸癌Me180細(xì)胞系遷移與侵襲能力的影響;4.機(jī)制研究:運(yùn)用 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)及Western-Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3組細(xì)胞中E-cad
4、herin mRNA及其蛋白的表達(dá),分析HPV16E6基因?qū)e180細(xì)胞遷移與侵襲能力影響的機(jī)制,并進(jìn)一步運(yùn)用甲基化特異性 PCR檢測(cè)三組細(xì)胞 E-cadherin甲基化狀態(tài)進(jìn)行驗(yàn)證。
結(jié)果:1.通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)、測(cè)序結(jié)果證實(shí)了攜帶 HPV16E6序列穿梭載體構(gòu)建成功,熒光顯微鏡圖片及Western blot結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)HPV16E6的腺病毒已成功轉(zhuǎn)染至宮頸癌Me180細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染效率高(80%-90%);2.Tra
5、nswell遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá) HPV16E6腺病毒轉(zhuǎn)染宮頸癌 Me180細(xì)胞后,同空白對(duì)照組相比較其細(xì)胞的遷移與侵襲能力顯著增強(qiáng)(P<0.05),而空白載體組相對(duì)空白對(duì)照組,其細(xì)胞的侵襲與遷移能力無(wú)明顯改變(P>0.05);3. RT-qPCR及Western-Blot實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá) HPV16E6組同空白對(duì)照組相比較,其E-cadherin mRNA及其蛋白的表達(dá)呈顯著下降(P<0.05),而空白載體組的與空白對(duì)照組相比較,其
6、E-cadherin mRNA及其蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化(P>0.05);4.甲基化特異性PCR顯示,過(guò)表達(dá)HPV16E6組的細(xì)胞E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)呈完全甲基化狀態(tài),其甲基化程度明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05),而空白載體組甲基化程度與空白對(duì)照組相比較,無(wú)明顯差異性(P>0.05)。
結(jié)論:1.HPV16E6基因可能通過(guò)下調(diào)宮頸癌細(xì)胞系 Me180中E-cadherin的表達(dá)水平增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞系Me180細(xì)胞遷移與
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 基因敲除HPV16E6對(duì)宮頸癌細(xì)胞p63蛋白的影響.pdf
- 抑制人類宮頸癌細(xì)胞HPV16 E6-E7基因活性的siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf
- siRNA干擾HPV16E6基因?qū)θ吮茄拾〩NE-1細(xì)胞株的影響.pdf
- HPV16E6與Daxx相互作用的效果及機(jī)制.pdf
- 宮頸鱗癌前驅(qū)病變的克隆性及HPV16E6基因整合和P16表達(dá)的研究.pdf
- HPV16E7基因慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定.pdf
- 干細(xì)胞基因OCT4過(guò)表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲遷移的影響研究.pdf
- RNA干擾表達(dá)載體抑制宮頸癌HPV16-E6基因表達(dá)的研究.pdf
- HPV16型E5基因?qū)θ擞郎谇簧掀ぜ?xì)胞E6-E7基因表達(dá)的影響.pdf
- HPV16E6對(duì)不同p53基因型宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響.pdf
- WISP2基因過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響.pdf
- 宮頸癌中FHIT基因表達(dá)與HPV-,16-E-,6-、HPV-,16-E-,7-基因表達(dá)的關(guān)系研究.pdf
- RNAi干擾HPV16 E6基因?qū)m頸癌Siha細(xì)胞的影響.pdf
- 宮頸癌HPV16E6抗原-HBD-2嵌合核酸疫苗的構(gòu)建及其在體內(nèi)外的表達(dá).pdf
- TLR3及HPV16E6變異在宮頸病變中的作用研究.pdf
- 山東青島地區(qū)宮頸癌組織中HPV16E6和E2基因突變分析.pdf
- 凋亡抑制蛋白XIAP、Survivin在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與HPV16E6、E7基因的相關(guān)性.pdf
- HPV16E6、E7蛋白和Survivin在宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展中的表達(dá)及意義.pdf
- HPV16E6、HPV18E7原癌蛋白免疫組化試劑盒的建立.pdf
- HPV58mE6E7融合基因疫苗構(gòu)建及其免疫效果的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論