有機(jī)錫對HepG2細(xì)胞的毒性效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、有機(jī)錫是目前使用最為廣泛的有機(jī)金屬之一。有機(jī)錫在農(nóng)業(yè)和工業(yè)方面的廣泛應(yīng)用是其在環(huán)境中積累的主要原因，盡管它的應(yīng)用帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)效益，但是隨之而來的環(huán)境問題也越來越突出。三丁基錫(Tributyltin，TBT)和三甲基錫(Trimethyltin，TMT)都屬于有機(jī)錫家族，它們的毒性已經(jīng)在很多細(xì)胞中得到了證實。但TBT和TMT細(xì)胞毒性效應(yīng)的分子機(jī)制還沒有完全闡述清楚。本實驗用TBT(0.5，1，2，4μM)和TMT(4，8，16，32

2、，64μM)處理HepG2細(xì)胞，分析其對HepG2細(xì)胞的毒性效應(yīng)，并對其誘導(dǎo)DNA損傷、對凋亡相關(guān)酶和蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果如下： 1．TBT和TMT對HepG2細(xì)胞的毒性。 通過MTT實驗，發(fā)現(xiàn)TBT和TMT可以顯著的抑制HepG2細(xì)胞的存活率，而且這種影響呈明顯的劑量效應(yīng)。進(jìn)一步的相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：處理組的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的變化：細(xì)胞的貼壁率明顯降低，胞間連接被破壞。Hoechst33342熒光染色實驗和流式細(xì)胞儀實驗

3、的結(jié)果表明：TBT和TMT均會誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡，而且呈現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。但總的說來，TBT的細(xì)胞毒性要比TMT的強(qiáng)，主要表現(xiàn)在0.5μM的TBT處理3 h就可顯著性地降低HepG2細(xì)胞的存活(p＜0.05)，而64μM的TMT處理24 h才表現(xiàn)出類似的結(jié)果。 2．TBT和TMT對HepG2細(xì)胞DNA損傷的影響。 通過彗星實驗發(fā)現(xiàn)，經(jīng)TBT和TMT處理后的HepG2細(xì)胞，其彗尾的長度(Tail Length)、

4、尾部DNA百分率(Tail DNA％)和尾矩(Tail Moment)均隨處理濃度的增高而增加，顯示出明顯的劑量效應(yīng)。對細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平檢測的結(jié)果發(fā)現(xiàn)：TBT和TMT處理后的HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS水平隨處理濃度的增高而升高，4μM的TBT處理3 h后細(xì)胞內(nèi)ROS水平與對照組差異顯著(p＜0.05)，認(rèn)為TBT和TMT誘導(dǎo)的DNA損傷與胞內(nèi)ROS水平的變化有關(guān)。 3．TBT和TMT對細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)因子的影響。 對

5、TBT和TMT處理后細(xì)胞內(nèi)凋亡通路相關(guān)蛋白的Western blot的檢測結(jié)果表明：胞漿中細(xì)胞色素C的表達(dá)水平隨處理濃度的增加而升高，Bax/Bcl-2的比值也隨TBT和TMT濃度的增加而升高，而與凋亡相關(guān)的p53蛋白表達(dá)水平?jīng)]有變化。對細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)的caspase—3，8，9活性的檢測結(jié)果顯示，caspase—3的活性均隨TBT和TM處理濃度的增加而升高；Caspase—8和caspase—9的活性隨TBT處理濃度的增加而升高，而T