橘皮竹茹湯及甘草瀉心湯質(zhì)量表征方法研究.pdf

1、中藥復方湯劑是中醫(yī)用藥的常見形式，但是傳統(tǒng)湯劑的煎煮、攜帶不便，標準難以統(tǒng)一，影響其臨床應用，因此簡便易用、滿足現(xiàn)代生活節(jié)奏的經(jīng)典名方標準顆粒的研發(fā)意義重大。為此，2013年“重大新藥創(chuàng)制”國家科技重大專項啟動了“經(jīng)典名方標準顆粒研究”的課題，由仲景宛西制藥股份有限公司等6家企業(yè)聯(lián)合有關專家開展包括橘皮竹茹湯與甘草瀉心湯在內(nèi)的20個經(jīng)典名方顆粒劑的示范性研究開發(fā)，目標是在遵循傳統(tǒng)煎煮方法、堅持“原汁原味”特點的同時，研究建立現(xiàn)代生產(chǎn)工藝

2、和質(zhì)量控制方法，生產(chǎn)出經(jīng)典名方的現(xiàn)代化產(chǎn)品，既標準顆粒。而該項工作的關鍵是保證經(jīng)典名方標準顆粒與其傳統(tǒng)湯劑物質(zhì)基礎的基本一致，從而滿足兩者在處方、治療病癥和用法上基本相同的要求，為標準顆粒的免臨床提供依據(jù)。為保證標準顆粒在處方、療效和用法上與傳統(tǒng)湯劑的一致，急需建立完善的經(jīng)典名方傳統(tǒng)湯劑質(zhì)量表征方法。本課題組以橘皮竹茹湯為研究對象，在保持原方、原劑量、原煎煮方法、原適應癥的基礎上開展了該傳統(tǒng)湯劑的質(zhì)量表征方法研究。參照傳統(tǒng)湯劑建立基準湯

3、劑后，按照國家藥品標準要求，并結合中藥自身藥效物質(zhì)基礎復雜多樣和整體成分發(fā)揮作用的特點，建立指紋圖譜整體控制結合多指標成分含量測定的質(zhì)量表征方法，對標準顆粒的質(zhì)量控制提供了技術支撐。
　　橘皮竹茹湯出自《金匱要略》，處方中包括橘皮、竹茹、大棗、甘草、人參、生姜等六味藥材，有著廣泛的臨床應用且療效顯著?，F(xiàn)在已有公司著手開展橘皮竹茹湯顆粒的研發(fā)工作，但橘皮竹茹湯或其中成藥于中國藥典中未見記載，沒有可以借鑒的物質(zhì)表征方法或質(zhì)控手段。

4、r>　　本文在傳統(tǒng)湯劑的基礎上建立了保持原方、原劑量、原煎煮方法的基準湯劑制備方法。依原方記載，取橘皮15 g，竹茹15 g，大棗12.5 g，甘草6 g，人參3 g，生姜9 g，加水2000 mL，浸泡30 min，閉蓋煮沸，開蓋以武火煎煮濃縮至600 mL后停止煎煮，減重約1250 g。隨后將湯劑冷凍并在真空中干燥得到總方凍干粉。為了避免樣品中等極性部位化學成分的損失，對總方凍干粉選用了醇沉的方法進行處理處理。將總方凍干粉用75％乙

5、醇處理后，得中等極性部位與多糖部位，為后續(xù)實驗奠定了基礎。
　　隨后將橘皮竹茹湯中等極性部位冷凍干燥后所得的凍干粉進行HPLC分析，對樣品的前處理方法、流動相、柱溫、梯度等條件進行了摸索，建立了橘皮竹茹湯中等極性部位的指紋圖譜，對橘皮竹茹湯基準湯劑中等極性部位物質(zhì)基礎的整體評價。在得到橘皮竹茹湯指紋圖譜后，通過將其與對照品溶液對照的方法對樣品進行定性鑒別，推測出橘皮竹茹湯中等極性部位指紋圖譜中的3個特征色譜峰，即橙皮苷、甘草苷、甘

6、草酸。同時將橘皮竹茹湯HPLC圖分別與其組方中各單味藥HPLC圖相比較，通過比對色譜峰的保留時間，推斷出色譜峰的可能藥材來源，并采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜結合對照品對照的方法對橘皮竹茹湯中等極性部位樣品中的物質(zhì)基礎進行了定性鑒別。
　　對橘皮竹茹湯多糖部位，根據(jù)課題組多年經(jīng)驗采用“TFA全水解-PMP柱前衍生化”的方法對樣品進行了前處理，并進行HPLC分析，得到了橘皮竹茹湯基準煎劑中多糖部位的指紋圖譜，通過與標準單糖衍生物混合溶液的HP

7、LC圖進行比較，對指紋圖譜全部9個特征峰進行指認。明確了橘皮竹茹湯多糖部位的單糖組成。本方法能夠用來表征橘皮竹茹湯多糖部位物質(zhì)基礎。同時，也是對橘皮竹茹湯中等極性部位指紋圖譜的有效補充。
　　為進一步完善橘皮竹茹湯的質(zhì)量表征方法，參考《中國藥典》2010版后選取部分橘皮竹茹湯處方單味藥中有專屬性的活性相關成分為指標成分，有橙皮苷、甘草酸、人參皂苷Rb1、6-姜辣素。對橘皮竹茹湯總方凍干粉分別采用不同的適當方法進行前處理后，借助HP

8、LC技術，建立了不同方法，從而對橘皮竹茹湯各指標成分含量進行測定，同時對各方法進行了方法學確證實驗，結果表明這些方法可靠、適用。
　　為保證基準湯劑研究用樣品具有代表性，各單味藥均由企業(yè)提供10批，且全部采用出自道地產(chǎn)地或主產(chǎn)區(qū)的藥材，每種藥材2-3個產(chǎn)地，每個產(chǎn)地至少3批，隨機組合，制備10批研究用湯劑并用干膏率、指標成分的含量測定及轉(zhuǎn)移率、指紋圖譜相似度來表征關鍵質(zhì)量屬性，為其標準顆粒研發(fā)過程中工藝的研究提供參考依據(jù)。

9、　　除以上工作外，作者還完成了部分甘草瀉心湯化學成分表征的工作。甘草瀉心湯出自《傷寒論》，由甘草、半夏、黃芩、黃連、人參、干姜、大棗七味中藥組成。作者建立了該湯劑中甘草苷、黃芩苷和人參皂苷Rb1的含量測定方法，對其進行了方法學確證，并完成了不同批次甘草瀉心湯中上述三種成分轉(zhuǎn)移率的計算。
　　本文首次建立了遵循原方、原劑量、原煎煮方法的橘皮竹茹湯基準湯劑的制備方法和橘皮竹茹湯中等極性部位的指紋圖譜，結合實驗室已有的成熟技術建立了橘皮

10、竹茹湯多糖部位指紋圖譜，較好地表征了橘皮竹茹湯的物質(zhì)基礎；為測定橘皮竹茹湯中各指標成分含量，建立了不同方法，并完成方法學確證研究；制備并測定了十批不同產(chǎn)地藥材隨機組合的基準煎劑樣品的出膏率、指紋圖譜相似度和指標成分含量，并計算指標成分轉(zhuǎn)移率。同時，建立了甘草瀉心湯中部分指標成分的含量測定方法，對其進行了方法學確證，并完成了不同批次甘草瀉心湯中指標成分轉(zhuǎn)移率的計算。該研究結果可作為工藝研究評價標準，全程指導工藝研究，確保標準顆粒與傳統(tǒng)湯劑