大黃鞣質(zhì)對膿毒癥血小板減少癥治療的研究.pdf

1、目的：本課題旨在探究大黃鞣質(zhì)(Rhubarb tannins)對肽聚糖(PGN)誘導健康人血小板凋亡及膿毒癥相關(guān)血小板減少癥患者的治療作用。為探索和改善膿毒癥相關(guān)血小板減少癥提供治療思路與證據(jù)。
　　方法：30例健康成年人，清晨空腹取血30mL，梯度離心法提取洗滌血小板，將提取的洗滌血小板平均分成五組，第一組加入5uL無鈣TB作為空白對照組（Control組），第二組用PGN孵育制造血小板凋亡模型（PGN組），使PGN在反應體系中

2、終濃度為500ng/mL，后三組在用PGN孵育的基礎上分別加入不同體積的大黃鞣質(zhì)干預，使大黃鞣質(zhì)在反應體系中的終濃度分別為25mg/L、50mg/L和100mg/L，低濃度大黃鞣質(zhì)組(PGN+LR組）、中濃度大黃鞣質(zhì)組(PGN+MR組)和高濃度大黃鞣質(zhì)組(PGN+HR組）。各組室溫下孵育30min后流式細胞術(shù)檢測血小板線粒體膜電位（△Ψm)衰減和磷脂酰絲氨酸(PS)外翻情況。離心收集細胞，每組加入RIPA+PMSF(100:1)120u

3、L冰上裂解細胞并間斷渦旋。裂解后高速離心留取上清，各組加入5*SDS-PAGE上樣緩沖液30uL混勻后95℃水浴10min。Western blot檢測血小板半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3活化后裂解片段、促凋亡蛋白Bak和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達情況。選取天津市第一中心醫(yī)院ICU2014年3月至2015年12月收治的膿毒癥血小板減少癥患者，病例總數(shù)為40例。隨機分為兩組：西醫(yī)組20例，采用常規(guī)綜合西醫(yī)治療方法；中西醫(yī)組20例

4、，采用常規(guī)綜合西醫(yī)治療+大黃鞣質(zhì)鼻飼的中西醫(yī)結(jié)合治療方法。于納入當天和療程結(jié)束后分別進行療效性指標觀察：急性生理學慢性健康狀況評分APACHEⅡ和中醫(yī)證候積分。抽取靜脈血檢測外周血血小板計數(shù)（PLT)、C反應蛋白（CRP)和血清降鈣素原(PCT)水平。分析治療前后各指標的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.與Control組比較，PGN組線粒體(△Ψm)正常的血小板百分比顯著下降; PS外翻的血小板百分比顯著上升； Caspas

5、e-3活化后裂解片段表達增加； Bak表達增加； Bcl-2表達減少。與PGN組比較， PGN+MR組和PGN+HR組線粒體（ATm)正常的血小板百分比有所上升； PS外翻的血小板百分比有所下降； Caspase-3活化后裂解片段表達有減少； Bak表達亦有所減少；Bcl-2表達有所增加。即:加入大黃鞣質(zhì)后減弱了由PGN誘導的血小板線粒體（△Ψm)的衰減、PS外翻、Caspase-3 活化后裂解片段和Bak的表達，增加了 Bc

6、l-2的表達。并且大黃鞣質(zhì)對PGN誘導血小板PS外翻和Caspase-3、Bak表達的抑制作用在50mg/L—100mg/L的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　2.經(jīng)過7天的治療后，西醫(yī)組和中西醫(yī)組APACHEⅡ、中醫(yī)證候積分、CRP、 PCT均較治療前有所下降，且中西醫(yī)組較西醫(yī)組差異更為顯著。 PLT水平較治療前有所上升，中西醫(yī)組上升較為明顯。
　　結(jié)論：
　　1.大黃鞣質(zhì)可以通過減弱PGN誘導的血小板線粒體（△Ψm)