番茄紅素緩解全氟辛酸對(duì)妊娠小鼠的肝臟毒性和生殖毒性研究.pdf

1、持久性環(huán)境污染物全氟辛酸(Perfluorooctane acid，PFOA)廣泛應(yīng)用于與人類(lèi)生活息息相關(guān)的各個(gè)領(lǐng)域，其對(duì)人和動(dòng)物的肝臟毒性與生殖毒性已經(jīng)引起了高度重視。番茄紅素(Lycopene)作為一種天然類(lèi)胡蘿卜素，擁有超強(qiáng)的抗氧化能力，有保護(hù)肝腎損傷、抑制腫瘤、提高免疫力等諸多功效。本試驗(yàn)旨在研究PFOA對(duì)妊娠期小鼠肝臟、子宮和胚胎的毒性作用以及番茄紅素的緩解作用。通過(guò)3部分試驗(yàn)探討了PFOA對(duì)小鼠妊娠早期和后期的毒性作用及番茄

2、紅素的保護(hù)作用和相關(guān)機(jī)制。
　　PFOA對(duì)妊娠早期小鼠的肝臟、子宮和胚胎的毒性研究。將妊娠0d小鼠隨機(jī)分至A、B、C、D、E、F6個(gè)組中，每組10只。A組為對(duì)照組，孕1d開(kāi)始每日按10 mg/kg體重灌服蒸餾水，B、C、D、E、F組分別按體重1，5，10，20，40 mg/kg每日經(jīng)口灌服PFOA（蒸餾水為溶劑）。監(jiān)測(cè)各組小鼠體重的變化。每組小鼠孕1-7d灌服PFOA，孕9d稱(chēng)重處死，采集待測(cè)樣品。計(jì)算肝臟指數(shù)和子宮指數(shù);統(tǒng)計(jì)平均

3、子宮重、平均胚胎著床數(shù);采集肝臟和子宮組織制備石蠟切片，HE染色觀察其病理學(xué)變化;制備小鼠肝勻漿并檢測(cè)其SOD、GSH-Px、MDA水平。結(jié)果顯示，20、40 mg/kg PFOA導(dǎo)致孕鼠體重下降;各PFOA染毒組肝指數(shù)均極顯著增加，呈劑量依賴(lài)性;肝臟病理變化顯著;10、20、40 mg/kg PFOA導(dǎo)致肝臟中SOD和GSH-Px酶活力顯著下降、MDA含量明顯提高，并呈劑量依賴(lài)性;40 mg/kg組孕鼠發(fā)生流產(chǎn)或胚胎吸收，病理學(xué)變化明

4、顯，子宮指數(shù)、平均子宮重和平均胚胎著床數(shù)均極顯著低于對(duì)照組。提示誘導(dǎo)肝臟內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化，可能是PFOA肝臟毒性的機(jī)理之一，妊娠早期高劑量PFOA染毒可能導(dǎo)致子宮淤血或胚胎丟失。
　　PFOA對(duì)妊娠后期小鼠子宮、胎兒的毒性作用研究。將所有妊娠0d孕鼠隨機(jī)分至6個(gè)小組中，每個(gè)組10只。A組為對(duì)照組，孕1d開(kāi)始每日按10 mg/kg體重灌服蒸餾水，B、C、D、E、F組分別按1，5，10，20，40 mg/kg體重每日灌服PFOA溶液。監(jiān)測(cè)

5、各組小鼠體重的變化。每組小鼠孕1～17 d灌服PFOA，孕18 d稱(chēng)重處死，完整取出肝臟和子宮，胚胎計(jì)數(shù)，稱(chēng)量肝重、子宮總重和每只胚胎重，采集子宮組織固定，制備石蠟切片，免疫組化檢測(cè)子宮細(xì)胞中Fas、FasL、Bax、Bcl-2、Caspase-3的分布和含量。TUNEL法檢測(cè)子宮中細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果表明，對(duì)照組、1、5 mg/kg組孕鼠體重持續(xù)增加，10，20 mg/kg組孕鼠體重呈緩慢上升趨勢(shì)，40 mg/kg小鼠全部流產(chǎn)，體重呈

6、下降趨勢(shì);除1 mg/kg組外，其余PFOA染毒組肝指數(shù)極顯著增加，子宮指數(shù)、平均子宮重、平均胚胎重和平均胚胎成活率均明顯降低;不同劑量的PFOA可以不同程度的增加Fas、FasL、Bax和Caspase-3的表達(dá)，降低Bcl-2的表達(dá)，降低Bcl-2/Bax比值;PFOA使子宮細(xì)胞凋亡數(shù)增加，且呈劑量依賴(lài)性。提示PFOA可通過(guò)調(diào)節(jié)子宮細(xì)胞中Fas、FasL、Bax、Bcl-2、Caspase-3凋亡蛋白的表達(dá)，促進(jìn)子宮細(xì)胞過(guò)度凋亡，導(dǎo)

7、致流產(chǎn)和胚胎發(fā)育緩慢。
　　番茄紅素對(duì)PFOA致小鼠肝臟及子宮損傷的緩解作用。將孕0d的小鼠隨機(jī)分至5個(gè)組中，每組10只。A組為對(duì)照組，孕1-8 d每日上午灌服大豆油，0.1 mL/只，孕1-7 d按10 mg/kg體重每日下午灌服蒸餾水;B組為模型組，孕1-8 d每日上午灌服大豆油，0.1 mL/只，孕1-7 d每日下午灌服20 mg/kg的PFOA溶液;C、D、E組分別為番茄紅素低、中、高劑量組，劑量分別為10 mg/kg，2

8、0 mg/kg，40 mg/kg，C、D、E組孕1-8 d每日上午灌服不同濃度番茄紅素，0.1 mL/只，孕1-7 d每日下午灌服20 mg/kg的PFOA溶液。記錄各組小鼠體重的變化，孕9d稱(chēng)重處死，采集肝臟，稱(chēng)重，計(jì)算肝臟指數(shù)，采集0.2 g肝組織制備肝勻漿，檢測(cè)SOD、GSH-Px、MDA含量;完整取出子宮，稱(chēng)重，統(tǒng)計(jì)子宮指數(shù)、子宮重。結(jié)果顯示，孕鼠灌服番茄紅素后，體重下降趨勢(shì)有所好轉(zhuǎn);番茄紅素高劑量組肝指數(shù)明顯低于模型組;番茄紅

9、素中、高劑量組子宮指數(shù)、平均子宮重均與模型組差異極顯著;番茄紅素高劑量組SOD和GSH-Px酶活性均比模型組有極顯著性提高，三個(gè)番茄紅素組均能降低MDA水平，與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。提示提高肝臟的抗氧化能力可能是番茄紅素保肝作用的機(jī)制之一。
　　結(jié)果表明，妊娠早期PFOA連續(xù)染毒小鼠可致明顯的肝臟毒性，并呈劑量依賴(lài)性，表現(xiàn)為肝指數(shù)明顯升高，肝臟出現(xiàn)明顯的病理變化，肝臟中SOD、GSH-Px酶活力降低，MDA含量增加。妊娠早期高劑量P