馬藍(lán)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及其靛藍(lán)、靛玉紅的提取與分析.pdf

1、本試驗(yàn)以馬藍(lán)的種子為外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得馬藍(lán)愈傷組織，從而建立馬藍(lán)細(xì)胞懸浮系，并從中提取、分離出馬藍(lán)靛藍(lán)、靛玉紅；研究不同水平或組合的激素、氮源、磷源、碳源、肌醇、細(xì)胞接種量條件等對(duì)馬藍(lán)細(xì)胞生長及其靛藍(lán)、靛玉紅合成的影響，從而建立馬藍(lán)懸浮細(xì)胞生長及其靛藍(lán)、靛玉紅合成的動(dòng)態(tài)曲線。研究結(jié)果如下： 1．用MS+0.2mg·L-12,4-D+1.0mg·L-1NAA+1.0mg·L-1BA培養(yǎng)基可獲得大量繁殖速度快、生長均勻一致的愈傷組

2、織。 2．靛藍(lán)、靛玉紅的HPLC檢測(cè)體系：色譜柱：C18柱(Waters 2695-2996)、流動(dòng)相：甲醇-水(90:10)、流速：0.5mL·min-1、檢測(cè)波長：290 nm、溫度：室溫。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)約20 d時(shí)，培養(yǎng)1g干重細(xì)胞可提取靛藍(lán)、靛玉紅含量分別為1.35和0.42 mg(DW)·g-1。 3．馬藍(lán)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果表明：以255 mg·L-1KH2PO4+2475 mg·L-1 NH4NO3+

3、150 mg·L-1肌醇+50 g·L-1蔗糖改良的MS為基本培養(yǎng)基并添加酸水解酪素、谷氨酰胺、脯氨酸，激素配方為0.4mg·L-12,4-D+3.0mg·L-1NAA+0.1mg·L-1KT+0.2mg·L-1BA，配合每20 mL培養(yǎng)液中接種0.04 g(DW)左右的細(xì)胞，為最適培養(yǎng)條件。 4．以最適培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，建立馬藍(lán)懸浮細(xì)胞生長與靛藍(lán)、靛玉紅合成的動(dòng)態(tài)曲線結(jié)果表明：0-3d為生長遲滯期，3-21d的對(duì)數(shù)生長期，21