新合成靛玉紅類化合物的抗腫瘤作用及其機制.pdf

1、目的:從一系列新合成的化合物中篩選出能夠有效抑制腫瘤細胞增殖的靛玉紅類化合物，探討其可能的抗腫瘤機制，為研發(fā)具有自主知識產權的抗腫瘤新藥奠定基礎。方法:對44種新合成的化合物進行初篩，篩選出一種水溶性好，抗腫瘤效果明顯的14號靛玉紅類化合物吲哚-3-取代物A。通過小鼠HepS移植瘤模型試驗檢測吲哚-3-取代物A的體內抑瘤作用。以不同濃度的吲哚-3-取代物A分別作用于SGC、HepG2、HeLa、A549四種腫瘤細胞株48h，MTT法檢測

2、化合物對腫瘤細胞增殖的影響，計算IC50值;選取HepG2細胞進行抗腫瘤機制研究。PI染色檢測細胞周期;DAPI染色及活細胞工作站觀察細胞形態(tài)及細胞核的變化;Annexin-V/PI雙染檢測細胞凋亡率;分別采用DCFH-DA、JC-1、Fluo-3/AM染色、熒光素酶法及Clark氧電極檢測線粒體ROS生成、膜電位、胞內Ca2+、ATP含量及細胞呼吸等功能性指標;Westernblot檢測細胞周期蛋白cyclinB1、cdc2及Bcl-

3、2、Bax的表達，caspase3、8、9的活化;檢測化合物對線粒體腫脹的影響以分析其與線粒體的直接作用。
　　 結果:通過MTT檢測和相差顯微鏡觀察5-80μmol/L6個濃度梯度的吲哚-3-取代物A作用于四種腫瘤細胞株，計算其IC50值在4-13μmol/L之間。其中吲哚-3-取代物A對HepG2細胞的作用最為敏感，并且時間和劑量依賴性地抑制HepG2細胞的增殖。同時，化合物抑制HepG2細胞的集落形成。吲哚-3-取代物A體

4、內抑瘤率達到60.O9％，抑瘤效果高于5-FU，且沒有明顯的毒副作用。吲哚-3-取代物A誘導HepG2細胞周期阻滯在G2/M期，明顯降低細胞周期相關蛋白cdc2和cyclinB1的表達水平;吲哚-3-取代物A作用于HepG2細胞表現出明顯的細胞核固縮、碎裂等凋亡特征，誘導HepG2細胞早期凋亡，且依賴于caspases的激活，裂解活化caspase3、8、9。另外，吲哚-3-取代物A誘導的細胞凋亡涉及到Bcl-2家族的蛋白水平的變化，降

5、低Bax的蛋白表達水平，時間依賴性增加Bcl-2的蛋白表達水平。通過進一步研究對線粒體功能的影響，發(fā)現吲哚-3-取代物A能夠部分清除細胞內的ROS水平，同時還影響線粒體功能，如線粒體膜電位降低、細胞內鈣離子超載，細胞內的ATP水平的增加。通過吲哚-3-取代物A作用于離體線粒體發(fā)現，化合物不能夠對抗Ca2+誘導的線粒體的腫脹，但能夠抑制線粒體內的ROS的生成，降低線粒體膜電位，損傷線粒體的功能。
　　 結論:吲哚-3-取代物A具有