吲哚-2-酮類化合物的合成及抗腫瘤活性研究.pdf

1、實驗?zāi)康?為尋求高效、特異性強(qiáng)以及毒副作用小的抗腫瘤藥物，本實驗以SU5416、SU6668以及SU11248等酪氨酸激酶抑制劑為先導(dǎo)物，設(shè)計合成了一系列吲哚-2-酮類化合物，并對其體外抗腫瘤細(xì)胞活性進(jìn)行篩選，但在之后抗FGFR1酪氨酸激酶活性的檢測中，這類化合物未能表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，因此嘗試從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑來初步探討藥物的抗腫瘤機(jī)制。
　　 實驗方法:
　　 1)根據(jù)吲哚-2-酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，設(shè)

2、計合成A、B、C三類化合物;用靛紅與苯環(huán)具有不同取代基的苯乙酮類化合物通過羥酮縮合、脫水合成A類化合物;B類化合物是在A類化合物苯環(huán)上氨基與酰氯通過親核加成反應(yīng)合成;C類化合物是靛紅與水合肼通過親核加成反應(yīng)形成腙，再與各種不同取代苯甲醛通過親核加成反應(yīng)合成的。
　　 2)通過IR、MS和1H-NMR等方法對所合成的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。
　　 3)采用MTT法，檢測化合物對H460、B16-F10、HCC827、H1975

3、、U251五種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　 4)采用Caliper Mobility Shift Assay法，檢測化合物對FGFR1酪氨酸激酶活性的抑制作用。
　　 5) CHOP作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞凋亡的重要信號分子，其表達(dá)與否驗證了藥物是否啟動了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞凋亡途徑，因此本論文用Western Blot法檢測了活性化合物對H460和B16-F10中CHOP蛋白表達(dá)的影響。
　　 6)用CHOP沉默的Cho

4、p-siRNA-H460細(xì)胞及CHOP未沉默的對照Control-virus-H460細(xì)胞，采用MTT法，測定、對比活性化合物作用下兩種細(xì)胞生存率的差異，進(jìn)一步來證實活性化合物A1和B3是否通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　 7)采用Hoechst33258染色法，在熒光顯微鏡下觀察活性化合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的情況。
　　 實驗結(jié)果:
　　 1)本論文共合成了27種化合物，其中11種是新化合物，通過化學(xué)

5、結(jié)構(gòu)表征，證明為目標(biāo)化合物。
　　 2)用MTT法測定了所有化合物在20μM濃度下對五種腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性的抑制率，大部分A類和B類化合物對五種腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出較好的抑制活性，它們對H460和B16-F10細(xì)胞具有更強(qiáng)的選擇抑制作用，多個化合物的活性均強(qiáng)于陽性對照吉非替尼;C類化合物對H460和B16-F10僅表現(xiàn)出較低的抑制活性，對HCC827、H1975和U251均未表現(xiàn)出明顯的抑制活性。其中，H460、B16-F10以及

6、HCC827對藥物刺激較為敏感，H1975和U251對藥物刺激沒有明顯反應(yīng)。
　　 3)測定了部分活性化合物對H460、B16-F10、HCC827及H1975細(xì)胞的IC50值，包括了作用于H460細(xì)胞的全部化合物的IC50值，對后三種細(xì)胞只測定了抑制率偏高的A類、B類化合物的IC50值。其中，化合物B1對四種細(xì)胞都有較強(qiáng)的抑制作用，IC50都低于10μM，而吉非替尼則對HCC827細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的抑制作用，IC50僅為0.05

7、μM左右。
　　 4) FGFR1激酶活性測試結(jié)果顯示，除化合物C1、C11對FGFR1激酶具有一定的抑制活性外，其它化合物均無明顯活性。
　　 5) Western Blot實驗顯示，20μM藥物作用下，化合物A1、A2、B3使H460細(xì)胞CHOP蛋白表達(dá)明顯上升，化合物B1、B3對B16-F10細(xì)胞CHOP蛋白的表達(dá)作用也非常明顯。
　　 6)沉默H460細(xì)胞中CHOP的表達(dá)，對A1和B3誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡活性有

8、一定的抑制作用。
　　 7) Hoechst實驗中，加藥物處理的H460和B16-F10細(xì)胞顯示出不同程度的凋亡。
　　 實驗結(jié)論:本文以酪氨酸激酶抑制劑為先導(dǎo)物設(shè)計合成了三類吲哚-2-酮化合物，其中A和B類化合物具有較好的抗腫瘤活性，但它們對FGFR1酪氨酸激酶均無明顯的抑制活性，其中具有較好抗腫瘤活性的A1、A2、B1、B3可能是基于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。因此，本論文吲哚-2-酮化合物的抗腫瘤機(jī)制還有待于進(jìn)