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文檔簡介
1、目的:證實(shí) E-Hsp70通過p-Stat3途徑介導(dǎo)的髓源抑制細(xì)胞(MDSCs)的免疫抑制活性。
方法:用蔗糖重水密度梯度及超速離心分離純化小鼠腎癌細(xì)胞(Renca細(xì)胞)分泌的 exosomes;透射電鏡形態(tài)學(xué)分析以及Western blotting進(jìn)行鑒定;流式細(xì)胞儀(flow cytometry, FCM)檢測MDSCs比例;ELISA檢測IL-6和VEGF分泌;小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)觀察MDSCs促腫瘤生長作用。RT-PCR和
2、Western blotting檢測Arg-1和iNOS mRNA和蛋白的表達(dá);Western blotting檢測p-STAT3、TLR2和MyD88的表達(dá)。
結(jié)果:成功分離并純化得到Renca細(xì)胞分泌的exosomes,Western blotting檢測其高表達(dá) Hsp70(E-Hsp70)。E-Hsp70較對(duì)照組更能促進(jìn)MDSCs擴(kuò)增及活化(P<0.05)。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組 MDSCs比例明顯升高,IL-6和VEG
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