乳酸菌培養(yǎng)上清液增強(qiáng)三陰性乳腺癌細(xì)胞對順鉑的敏感性的研究.pdf

1、背景及目的：
　　三陰性乳腺癌在臨床上預(yù)后較差，常用采用化療。常用的藥物順鉑(DDP)可作為三陰性乳腺癌的解救治療藥物或是術(shù)后復(fù)發(fā)的二線化療藥物。DDP的作用機(jī)制是干擾DNA的復(fù)制，其靶點(diǎn)在DNA的嘌呤與嘧啶的堿基，具有細(xì)胞毒性，有較強(qiáng)的殺腫瘤效果。臨床上，順鉑耐藥問題日益嚴(yán)重，設(shè)法提高原有藥物的敏感性，避免藥物劑量依賴性增加的不良反應(yīng)，成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)。
　　Piwil2是癌-睪丸基因家族中的一員，僅表達(dá)于睪丸生精細(xì)胞，

2、而其他組織均未見表達(dá)。近年來發(fā)現(xiàn)，Piwil2可修復(fù)DNA的損傷，這種現(xiàn)象提示了腫瘤中高表達(dá)Piwi12可能是DDP的一種新的耐藥機(jī)制。
　　近年來，乳酸菌的多種有益功能，包括調(diào)節(jié)腸道菌群、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等功效被發(fā)現(xiàn)，使得關(guān)于乳酸菌的研究逐漸成為熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌培養(yǎng)上清液可下調(diào)Piwi12基因在乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)。
　　綜上，由于DDP的殺腫瘤機(jī)制與破壞腫瘤的DNA復(fù)制有關(guān)，Piwil2基因又與DNA修復(fù)緊密聯(lián)系，同時(shí)

3、研究發(fā)現(xiàn)，沉默宮頸癌細(xì)胞Piwil2基因的表達(dá)能夠增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞對DDP的敏感性，而在乳腺癌細(xì)胞系中未見文獻(xiàn)報(bào)道;又有研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌培養(yǎng)上清液(LS)可下調(diào)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中Piwil2基因的表達(dá)。根據(jù)以上依據(jù)可提出問題，Piwil2是否與DPP耐藥有關(guān)，以及LS能否通過下調(diào)Piwil2增敏DDP?故本研究目的是驗(yàn)證LS能否下調(diào)Piwil2基因，以及探究LS能否增強(qiáng)三陰性乳腺癌細(xì)胞對DDP的敏感性。
　　方法：

4、r>　　采用CCK8試劑盒和Western blotting檢測不同劑量DDP(0、1、2、3、4、5μg/ml)對三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖的基線情況和Piwil2基因表達(dá)水平的影響;瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Piwil2siRNA沉默MDA-MB-231細(xì)胞中Piwil2基因表達(dá)，Western blotting檢測siRNA沉默效果，CCK8檢測Piwil2基因沉默后，對MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的影響情況;采用CCK8分析

5、和Western blotting檢測和不同濃度LS(1％、5％、10％、20％(v/v))與2μg/ml DDP聯(lián)合不同濃度LS(1％、5％、10％、20％(v/v))處理MDA-MB-231細(xì)胞，檢測細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)和Piwil2蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　當(dāng)濃度＞3μg/ml時(shí)DDP可明顯抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增殖(P＜0.05)，而濃度＜2μg/ml時(shí)DDP不能有效抑制細(xì)胞的增殖;DDP以劑量依賴

6、性的方式上調(diào)Piwil2蛋白的表達(dá);siRNA沉默Piwil2的表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)2μg/ml DDP對細(xì)胞增殖的抑制。與MRS組比較，LS以劑量依賴性方式下調(diào)Piwil2蛋白的表達(dá)但并不會(huì)影響細(xì)胞的增殖;與單用2μg/ml DDP比較，2μg/ml DDP聯(lián)合20％LS處理細(xì)胞，Piwil2蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)且細(xì)胞增殖也受到抑制(P＜0，05)。
　　結(jié)論：
　　三陰性乳腺癌細(xì)胞中Piwil2的高表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞對順鉑敏感性的降低

7、;沉默Piwil2基因的表達(dá)增強(qiáng)三陰性乳腺癌細(xì)胞對順鉑的敏感性;乳酸菌培養(yǎng)上清液可通過下調(diào)Piwil2基因的表達(dá)增強(qiáng)三陰性乳腺癌細(xì)胞對順鉑的敏感性。
　　意義：
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能為三陰性乳腺癌細(xì)胞DDP耐藥提供一個(gè)新的機(jī)制，并且這是首次研究乳酸菌培養(yǎng)上清液與增敏DDP的關(guān)系，該試驗(yàn)進(jìn)一步鞏固了乳酸菌的“益生菌”地位，同時(shí)該療法可能是一種有效而無毒的、成本也較低廉的生物療法，進(jìn)一步研究證實(shí)其作用和機(jī)制，可為其將來批量生產(chǎn)和臨