Ptch-1和Smo在不同級別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的：研究SHH信號通路中Ptch-1蛋白和Smo蛋白在不同級別膠質(zhì)瘤及正常腦組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性。
　　方法：
　　1.收集我院神經(jīng)外科2014年至2016年手術(shù)獲得膠質(zhì)瘤患者標(biāo)本（依據(jù)《中國中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤診斷和治療指南》中WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類將膠質(zhì)瘤分為 WHOⅠ-Ⅳ級，Ⅰ、Ⅱ級為低級別膠質(zhì)瘤，Ⅲ、Ⅳ級為高級別膠質(zhì)瘤。故將實(shí)驗(yàn)分為高級別膠質(zhì)瘤組和低級別膠質(zhì)瘤組）。
　　2.將不同級別的膠質(zhì)瘤組織共6

2、5例（其中高級別膠質(zhì)瘤組41例，低級別膠質(zhì)瘤組24例）及正常腦組織共10例，經(jīng)甲醛固定待用。不同級別的膠質(zhì)瘤組織共20例（其中高級別膠質(zhì)瘤10例，低級別膠質(zhì)瘤10例）及正常腦組織共10例，凍存于-80℃冰箱待用。（正常腦組織標(biāo)本均來自神經(jīng)外科顱腦外傷患者需行減壓的正常腦組織，術(shù)前已告知患者家屬標(biāo)本的用途并取得患者家屬同意）
　　3.應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同級別的膠質(zhì)瘤組和正常腦組織組中的表達(dá)水平。

3、r>　　4.應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測Ptch-1蛋白及Smo蛋白的mRNA在不同級別的膠質(zhì)瘤組和正常腦組織組中的表達(dá)水平。
　　5.應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）檢測Ptch-1蛋白及Smo蛋白在不同級別的膠質(zhì)瘤組和正常腦組織組中的表達(dá)水平。
　　6.應(yīng)用統(tǒng)計軟件IBM SPSS21.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Ptch-1蛋白的表達(dá)水平：低級別膠質(zhì)瘤組

4、陽性表達(dá)率為62.5％（15/24），高級別膠質(zhì)瘤組陽性表達(dá)率為92.7%（38/41），兩者之間的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。正常腦組織組中Ptch-1蛋白的陽性表達(dá)率為10%（1/10）。低級別膠質(zhì)瘤組和高級別膠質(zhì)瘤組陽性表達(dá)率與正常腦組織組的陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Smo蛋白的表達(dá)水平：低級別膠質(zhì)瘤組陽性表達(dá)率為75.0%（18/24），高級別膠質(zhì)瘤組陽性表達(dá)率為95.1%（39/41），兩者

5、之間的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。正常腦組織中 Smo蛋白的陽性表達(dá)率為：20%（2/10）。正常腦組織組的陽性表達(dá)率分別與低級別膠質(zhì)瘤組、高級別膠質(zhì)瘤組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各組中均可見目的蛋白mRNA的表達(dá)。其中低級別膠質(zhì)瘤組Ptch-1 mRNA相對表達(dá)量是0.0018364±0.0015966，高級別膠質(zhì)瘤組Ptch-1 mRNA相對表達(dá)量是0.002765

6、9±0.0028038，兩者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.374＞0.05）。正常腦組織組Ptch-1 mRNA相對表達(dá)量是0.0006005±0.0005233。正常腦組織組分別和低級別膠質(zhì)瘤組、高級別膠質(zhì)瘤組之間的相對表達(dá)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Smo mRNA在高級別膠質(zhì)瘤組的相對表達(dá)量是0.0078187±0.0054682，其在低級別膠質(zhì)瘤組的相對表達(dá)量是0.0037597±0.0016477，兩者之間相對表達(dá)量差

7、異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Smo mRNA正常腦組織組相對表達(dá)量是0.0007974±0.0005546，正常腦組織組和低級別膠質(zhì)瘤組、高級別膠質(zhì)瘤組之間相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Ptch-1的相對表達(dá)量在低級別膠質(zhì)瘤組中是0.4771±0.1187，在高級別膠質(zhì)瘤中為0.6967±0.1880，兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Ptch-1在正常腦組織

8、組中相對表達(dá)量為0.3155±0.1314。正常腦組織組與低級別膠質(zhì)瘤組及高級別膠質(zhì)瘤組之間相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Smo的相對表達(dá)量在低級別膠質(zhì)瘤組中為0.4976±0.1039，高級別膠質(zhì)瘤組為0.6477±0.1730，二者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。正常腦組織中 Smo相對表達(dá)量為0.2703±0.0914。正常腦組織組與低級別膠質(zhì)瘤組和高級別膠質(zhì)瘤組之間的相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.

9、05）。
　　4.Ptch-1和Smo蛋白相關(guān)性統(tǒng)計：在qRT-PCR實(shí)驗(yàn)中，Ptch-1和Smo蛋白的相關(guān)系數(shù)為：R=0.514（P＜0.05）；在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，Ptch-1和Smo蛋白的相關(guān)系數(shù)為：R=0.655（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.Ptch-1、Smo在膠質(zhì)瘤及正常腦組織中均有表達(dá)，但在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平顯著高于正常腦組織，提示SHH信號通路在膠質(zhì)瘤中普遍處于激活狀態(tài)，其可能