斑馬魚高血脂模型的建立及小檗胺降血脂機(jī)制研究.pdf

1、隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活水平的提高，高血脂及其并發(fā)癥已經(jīng)成為影響人類生命健康的主要危險(xiǎn)因素。高血脂癥是一種脂質(zhì)代謝紊亂的現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為血漿總膽固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-c）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）水平發(fā)生異常。有資料顯示，高血脂癥與動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、高血壓、糖尿病等疾病的發(fā)生有關(guān)。導(dǎo)致高血脂癥的因素很多，如遺傳因素、飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣、神經(jīng)因素等。對(duì)于高血脂癥的治療，目前臨床上主要用的是他

2、汀類藥物，如辛伐他汀。血漿中 TC和 LDL-c水平增多是誘發(fā)心血管疾病的主要因素，而保持體內(nèi)膽固醇平衡是預(yù)防和治療高血脂癥及其并發(fā)癥的關(guān)鍵。維持體內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)主要有以下途徑：降低羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGCR）的活性從而抑制內(nèi)源性膽固醇的合成；增加低密度脂蛋白膽固醇受體（LDLR）的表達(dá)，加速膽固醇吸收；上調(diào)膽固醇-7ɑ-羥化酶（CYP7A1）的活性，促進(jìn)體內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)化膽汁酸排出體外。因此，針對(duì)各個(gè)途徑的關(guān)鍵基因，如HMGCR、

3、LDLR和CYP7A1是目前降膽固醇藥物篩選的重要靶標(biāo)。
　　目前用于篩選降血脂藥物的方法包括體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。體外實(shí)驗(yàn)方法可分為分光光度法、薄層層析法、同位素標(biāo)記法、HPLC法以及細(xì)胞培養(yǎng)。體外實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)周期短、方便快捷、成本低，因此適用于大批量篩選。但由于體外實(shí)驗(yàn)無(wú)法模擬藥物在體內(nèi)的效果，因此具有一定的局限性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)主要用到嚙齒動(dòng)物模型，常用到的高血脂動(dòng)物模型包括大鼠、金黃地鼠和豚鼠等。先喂養(yǎng)高膽固醇高甘油三酯飼料造模，通

4、過測(cè)定血清TC和TG水平確定造模是否成功，然后再用藥物處理檢測(cè)降血脂效果。實(shí)驗(yàn)存在周期長(zhǎng)、成本高、藥物需要量大等弊端。因此建立一種快速有效的動(dòng)物模型用于降脂藥物的篩選具有十分重要的意義。
　　斑馬魚作為一種新興的模式動(dòng)物近年來(lái)廣泛用于人類疾病研究。我國(guó)傳統(tǒng)中藥歷史悠久，大量研究表明中藥在降血脂方面具有良好效果。本實(shí)驗(yàn)主要研究了高血脂斑馬魚模型的建立及54種中藥降血脂效果比較，并系統(tǒng)研究了小檗胺對(duì)高血脂斑馬魚的降血脂機(jī)制。
　

5、　本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果：
　?。?）對(duì)斑馬魚喂養(yǎng)含4％膽固醇的飼料，檢測(cè)不同時(shí)間血漿TC水平。結(jié)果表明與對(duì)照組相比，高膽固醇飼料喂養(yǎng)20天后，斑馬魚血漿和肝臟脂質(zhì)含量顯著升高，5種陽(yáng)性藥物對(duì)其均有降血脂效果。模型組肝臟HMGCR和LDLR mRNA表達(dá)下降，并且CYP7A1a mRNA表達(dá)升高，其表現(xiàn)與哺乳動(dòng)物模型相似，說明高血脂斑馬魚模型造模成功。
　　（2）通過應(yīng)用斑馬魚高血脂模型，實(shí)驗(yàn)從54種中藥中初步篩選出了降脂功

6、效較好的幾種中藥，其中顯著降低血漿TC和TG水平的中藥有黃連，槐米，姜黃，羅布麻，桔梗，赤芍，金櫻子。調(diào)節(jié)TC水平明顯的有綠茶，苦丁，蘆薈，黃芪，山楂，山藥，丹參。調(diào)節(jié)TG水平顯著的有金銀花，葛根，胡椒。
　?。?）基于以上結(jié)果，我們進(jìn)一步探索了黃連中次要生物堿小檗胺（BBM）的降血脂效果及機(jī)制。對(duì)斑馬魚胚胎的研究發(fā)現(xiàn)，5μg/mL，10μg/mL和20μg/mL BBM對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育和細(xì)胞沒有明顯毒性，并且20μg/mL BB

7、M可以降低心律。對(duì)斑馬魚幼魚研究發(fā)現(xiàn)，BBM可以改善血管膽固醇水平。對(duì)斑馬魚成魚的研究發(fā)現(xiàn)，BBM可以降低血漿TC和LDL-c水平，減少肝臟中脂肪堆積，下調(diào)HMGCR和MTP的轉(zhuǎn)錄，上調(diào)LDLR和CYP7A1a mRNA水平。
　　總之，斑馬魚可以用于不同靶點(diǎn)降脂中藥的篩選，應(yīng)用高血脂斑馬魚模型可以加快降血脂中藥的研發(fā)。BBM對(duì)高血脂斑馬魚具有較好的降血脂效果，其分子機(jī)制可能是抑制膽固醇的合成和脂蛋白的組裝分泌，促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)和