PRP對兔脂肪間充質干細胞AnxA1基因和PPARγ基因表達的影響.pdf

1、研究背景:
　　自從Zuk提取并報道脂肪間充質干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)后，人們逐漸發(fā)現ADSCs取材容易，來源豐富、自我更新能力強、活力持久并具有多向分化的功能。后續(xù)一系列實驗又發(fā)現，ADSCs是具有促進增殖、組織修復能力的干細胞。其可以通過離體培養(yǎng)和誘導分化成脂肪細胞，并普遍存在于脂肪細胞周圍，具有促進脂肪細胞的更新及恢復能力。由于自體脂肪移植技術可以改善面部缺損、小乳癥等臨床常

2、見問題，因此受到整形外科醫(yī)生的關注，并廣泛于臨床應用。在臨床實際應用過程中，臨床醫(yī)生發(fā)現移植后脂肪細胞成活率很低、脂肪細胞易發(fā)生感染、患者對移植后外形不滿意等一系列問題，使其在臨床的應用受到限制，這也成為整形外科領域中迫切需要解決的難題。富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)主要是抽吸新鮮動脈血液，經過離心后，最后獲得含有高濃度血小板的血漿。然而關于PRP制備的方法，國內外說法不一，但主要都是通過離心方法獲取。

3、我們發(fā)現在一定時間內，PRP可以促進移植后脂肪存活，然而如何促進增殖的作用機制還不十分清楚，有待進一步研究。研究發(fā)現AnxA1基因與PPARγ基因可以影響干細胞增殖，并促進移植后受區(qū)脂肪細胞的成活，因此在一定時間內，通過向ADSCs中加入PRP的實驗，檢測這兩種基因的具體表達情況，有助于探討PRP的作用機制。
　　目的:
　　研究通過向兔脂肪間充質干細胞(ADSCs)中加入富血小板血漿(platelet-rich plasm

4、a，PRP)的實驗，檢測對這兩種基因的表達存在顯著的作用。
　　方法:
　　取材于純種新西蘭大白兔附睪，剝離外面包膜，取出脂肪墊，胰酶消化后，采用倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及鑒定，將脂肪間充質干細胞置于孵箱中培養(yǎng)、進行傳代培養(yǎng)至第四代，提取兔心臟動脈血20毫升，通過傳統(tǒng)二次離心法制備富血小板血漿PRP(platelet-rich plasma)和貧血小板血漿PPP(platelet-poor plasma)，實驗分三組，即

5、PRP組（實驗組）、PPP組（陽性對照組）及空白完全培養(yǎng)基組（空白對照組），將純化的第四代脂肪間充質干細胞置入其中，并加入5％的全培，孵箱中分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，獲取總RNA后，通過反轉錄PCR(reverse transcription-PCR， RT-PCR)檢測目的基因AnxA1基因和PPARy基因表達量的變化。
　　結果:
　　1.倒置相差顯微鏡下觀察，原代兔脂肪間充質干細胞部分漂浮在培養(yǎng)液中，部分呈貼壁

6、狀態(tài)，早期形狀為橢圓形，繼續(xù)培養(yǎng)24h后可見原代細胞在25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，形狀呈“梭形”，且約70％貼壁生長，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，觀察呈“梭形”、“短棒狀”;經過3-4次換液、培養(yǎng)傳代后，倒置相差顯微鏡下觀察，細胞得到純化，符合干細胞形態(tài)學特征。
　　2.脂肪間充質干細胞分別通過油紅O染色和茜素紅染色進行誘導分化，2周后倒置相差顯微鏡下觀察見紅色脂滴和片狀鈣化結節(jié)，結果均為陽性，表明培養(yǎng)的細胞是脂肪間充質干細胞，并證明其具有多向