GDNF-RET信號調(diào)控Hedgehog信號通路及其在腫瘤生物學行為中的意義研究.pdf

1、大量研究表明，原癌基因RET和Hedgehog(Hh)信號通路的異常表達均與發(fā)育和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但RET是否調(diào)控Hh通路卻鮮有報道?；谝陨弦蓡?，本研究首先借助Hh靶基因Gli-1的雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源表達RET的成神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y經(jīng)RET蛋白激活物膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Glia1 cell-line derived neurotrophic factor, GDNF）處理，Gli-1報告基因的

2、活性增加。進一步在293T細胞和SH-SY5Y細胞中共轉(zhuǎn)RET過表達質(zhì)粒和Gli-1報告基因質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)在這兩種細胞系中過表達RET均可增加Gli-1報告基因活性，證實RET參與調(diào)控Hh通路。過表達RET下游分子Akt的激活形式可增加Gli-1報告基因活性。而使用MK-2206抑制Akt活性或慢病毒敲降A(chǔ)kt后，激活RET并不能上調(diào)Gli-1的mRNA水平，證實RET通過Akt調(diào)控Hh通路。進一步，為研究Hh通路中的那個分子是RET調(diào)控的

3、靶點，我們利用Cyclopamine特異性抑制該通路的關(guān)鍵分子Smoothened(SMO)的活性，發(fā)現(xiàn)激活RET依然能增加Gli-1的mRNA水平，提示RET可能作用于膜受體SMO的下游。通過對SMO下游相關(guān)分子PKA、GSK3β、CK1的磷酸化水平檢測，發(fā)現(xiàn)激活RET或Akt能降低GSK3β的磷酸化。因GSK3β負向調(diào)控Hh通路，抑制GSK3β則可激活Hh通路，且該作用不受MK-2206或RET敲降影響，提示RET/Akt可通過抑制