人孤獨癥相關(guān)基因NRXN1β啟動子區(qū)相關(guān)功能初步分析.pdf

1、目的：定義NRXN1β基因的最小啟動子區(qū)和調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的功能元件。
　　方法：首先通過構(gòu)建含有NRXN1β基因上游調(diào)控區(qū)不同區(qū)域基因組序列的熒光素酶報告基因質(zhì)粒，利用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測報告基因的轉(zhuǎn)錄活性以確定 NRXN1β基因最小啟動子區(qū)域，再進(jìn)一步篩選出相應(yīng)的顯著增強(qiáng)或抑制報告基因活性的功能區(qū)；然后利用基因定點突變技術(shù)對功能區(qū)內(nèi)和功能區(qū)臨近DNA序列進(jìn)行連續(xù)的堿基突變，并分析這些突變對報告基因活性的作用；最后結(jié)合在線轉(zhuǎn)錄

2、因子預(yù)測軟件PROMO，對功能區(qū)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位元件進(jìn)行初步分析。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了含有不同啟動子區(qū)域和含有突變的兩個系列的NRXN1β啟動子-熒光素酶報告基因，相對熒光素酶活性結(jié)果顯示p4NRXN1β-88/+668（9.63±1.46）與p4NRXN1β-73/+668（2.08±0.51）相比、p4NRXN1β-106/+156（27.07±3.90）與 p4NRXN1β-106/+149（4.99±0.79）相比、p4N

3、RXN1β-106/+229（25.20±4.67）與p4NRXN1β-106/+419（12.53±1.51）相比，3組數(shù)據(jù)前者的熒光素酶活性都高于后者，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；為了評估-88/-73功能區(qū)及臨近堿基，利用基因定點突變技術(shù)成功構(gòu)建了一系列的含有突變堿基的質(zhì)粒，雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，-84/-63區(qū)域內(nèi)突變的質(zhì)粒與未突變相比活性降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)對該區(qū)域內(nèi)可