ATF4重組慢病毒對成骨和軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響及PGRN---小鼠骨損傷愈合的初步研究.pdf

1、目的:構(gòu)建人的活性轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4)基因慢病毒載體并包裝慢病毒顆粒(lentivirus)，探討ATF4基因慢病毒修飾對成骨和軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響；同時對PGRN-/-小鼠骨損傷愈合進(jìn)行初步研究。
　　方法:將帶有目的基因ATF4的慢病毒載體質(zhì)粒pWPT-GFP-ATF4與慢病毒包裝骨架質(zhì)粒pSPAX2、pMD2G共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞中，包裝成ATF4慢病毒(LV-ATF4)；培養(yǎng)C2C12細(xì)胞，采用BMP2誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞

2、分化，觀察LV-ATF4感染對細(xì)胞增殖和凋亡的影響；將C3H10細(xì)胞進(jìn)行高密度微團培養(yǎng)，采用BMP2誘導(dǎo)其向軟骨細(xì)胞分化，分別在BMP2誘導(dǎo)不同時間階段，檢測LV-ATF4對軟骨細(xì)胞分化中增殖凋亡的影響；手術(shù)建立小鼠骨折和骨缺損模型，分析PGRN-/-小鼠與野生型小鼠骨損傷后愈合狀況及ER Stress相關(guān)分子的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建和包裝滴度為1×108efu/mL的ATF4重組慢病毒；在BMP2誘導(dǎo)C2C12向成骨細(xì)胞

3、分化過程中，感染LV-ATF4能加速細(xì)胞的凋亡，抑制細(xì)胞增殖和分化；在BMP2誘導(dǎo)C3H10軟骨細(xì)胞分化過程中，感染LV-ATF4促進(jìn)細(xì)胞的凋亡；成功建立野生型小鼠與PGRN-/-小鼠的骨折和骨缺損模型，與野生型小鼠相比，PGRN-/-小鼠骨損傷后愈合程度下降，ER stress相關(guān)分子表達(dá)下降。
　　結(jié)論:ATF4基因過表達(dá)可以促進(jìn)BMP2誘導(dǎo)C2C12成骨細(xì)胞分化過程中細(xì)胞的凋亡、抑制細(xì)胞增殖和分化；同時促進(jìn)BMP2誘導(dǎo)C3H