鹽皮質激素受體拮抗劑調控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用.pdf

1、目的:矽肺是由于長期吸入大量游離二氧化硅粉塵所引起以肺部廣泛的結節(jié)性纖維化為主的疾病。矽肺是塵肺中最常見、進展最快、危害最嚴重的一種類型，即使脫離暴露因素，患者肺功能仍進行性惡化，目前尚無有效治療方法[1，2]。目前普遍認為，巨噬細胞在矽肺的發(fā)病機制中占據至關重要的作用，而巨噬細胞異質性與肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展也具有密切關系[3，4]。鹽皮質激素受體(MR)激活能夠引發(fā)主動脈、心臟和腎臟血管周圍和間質纖維化形成，同時MR參與了單核巨噬細胞

2、表型的調節(jié)[5]。阻斷MR能否減輕矽肺纖維化程度及其作用機制尚不明確。
　　本研究擬首先探討實驗性矽肺小鼠不同病理生理時期肺泡巨噬細胞和間質巨噬細胞表型的動態(tài)變化，旨在發(fā)現肺泡/間質巨噬細胞異質性與矽肺肺組織炎癥和纖維化的關系。然后，通過阻斷MR，探討MR受體拮抗劑（螺內酯）引起巨噬細胞表型偏移的變化及其對實驗性矽肺急性期炎癥及后期纖維化的作用。
　　方法:
　　1100只雄性C57BL/6J小鼠隨機分為二氧化硅組（s

3、ilica組）和生理鹽水組（saline組），經異氟烷麻醉后，采取經口咽吸入法建立實驗性矽肺模型，分別給予40μL二氧化硅混懸液和相同體積生理鹽水。造模后第1、3、7、14、28天取材，一半小鼠進行經支氣管肺泡灌洗，用于支氣管肺泡灌洗液(BALF)細胞計數及分類計數，流式細胞術檢測肺泡巨噬細胞和間質巨噬細胞亞群;另一半小鼠左肺用于病理學檢測，分別進行HE染色、masson染色及α-SMA免疫熒光染色，右肺提取總RNA，進行Arg-1、C

4、ol-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表達量檢測。
　　2120只雄性C57BL/6J小鼠隨機分為生理鹽水組（saline組）、二氧化硅組（silica組）、二氧化硅加生理鹽水組（silica+saline組）及二氧化硅加螺內酯干預組（silica+SPI組）。造模方法同上，silica+SPI組每天灌胃給予螺內酯(10mg/kg)，silica+saline組灌胃給予同體積生理鹽水。造模后第3、14、28天取材，檢測方法同前。
　

5、　結果:
　　1 HE染色顯示，與saline組相比，silica組可見肺泡間隔增厚、間質及肺泡腔內大量炎性細胞增生、浸潤，并形成細胞團，炎癥評分(IS)明顯增高(P＜0.001)，于第3天達到峰值。Masson染色結果顯示，silica組小鼠第14天出現藍染膠原纖維，膠原沉積持續(xù)增高，到第28天膠原容積分數(CVF)明顯高于saline組（P＜0.001）。同樣，silica組第14、28天肺組織α-SMA含量明顯高于salin

6、e組。
　　Silica組小鼠各個時間點BALF細胞總數均明顯高于saline組。silica組第1天巨噬細胞較saline組無明顯增高，隨后持續(xù)增高，于第3天后明顯高于saline組(P＜0.001)。與saline組相比，silica組第1天中性粒細胞數顯著增高，比例高于巨噬細胞，之后呈下降趨勢，至28天與saline組無統(tǒng)計學差異。
　　silica組第14天及28天小鼠肺組織ColⅠ mRNA、ColⅢ mRNA表達

7、量均明顯高于saline組(P＜0.05)。與saline組相比，silica組小鼠肺組織Arg-1 mRNA表達量于第1天開始升高，至第3天明顯高于saline組小鼠(P＜0.01)，持續(xù)至第7天后呈下降趨勢，到纖維化期(15-28d)兩組無差異。
　　與saline組相比，silica組小鼠M2 AMψ(PI-CD64+CD206+)比例于第1天明顯增高(P＜0.01)，并呈現持續(xù)增高趨勢，至第28天顯著高于saline組。而

8、M2 IMψ(PI-CD64+CD11b+CD206+)比例于第1天顯著增高(P＜0.01)，而后呈稍下降趨勢，但直至28天仍明顯高于saline組。M1AMψ及IMψ與CVF呈一定程度正相關關系。
　　2 silica+SPI組急性炎癥期IS低于silica+saline組(P＜0.05)，而纖維化期CVF明顯減低(P＜0.01)，α-SMA陽性區(qū)域也相對較少。
　　silica+SPI組小鼠BALF細胞總數明顯低于sil

9、ica+saline組，中性粒細胞也呈相同趨勢。silica+SPI組小鼠第3天BALF巨噬細胞數略低于silica+saline組，差異無統(tǒng)計學差異，纖維化期（第14d、28d），silica+saline組巨噬細胞數明顯增高，而給予螺內酯干預組升高不明顯，因此silica+SPI組小鼠BALF巨噬細胞數明顯少于silica+saline組（P＜0.05）。
　　silica+SPI組小鼠肺組織ColⅠ、ColⅢ mRNA表達量

10、均低于silica+saline組（P值分別為＜0.05和＜0.01）。
　　與saline組相比，給予二氧化硅后纖維化期小鼠M1 AMψ比例顯著增高，而silica+SPI組小鼠M1 AMψ比例較silica+saline組明顯下降（P＜0.01）。給予螺內酯干預小鼠M1 IMψ比例也相應下降(P＜0.01)。
　　結論:1）實驗性矽肺小鼠肺泡/間質巨噬細胞由M1向M2表型偏移;2) M1肺泡/間質巨噬細胞與實驗性矽肺小鼠