肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Iα(CPTIα)在酒精性肝病中發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:酒精性肝病(Alcoholic liver disease，ALD)是由于長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。脂肪肝是ALD的早期表現(xiàn)形式，繼而可進(jìn)展為酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化。嚴(yán)重酗酒時(shí)可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死，甚至肝功能衰竭。流行病學(xué)研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國(guó)酒精性肝病占同期肝病患者比例呈逐年上升趨勢(shì)。酒精對(duì)肝細(xì)胞的毒性作用已成為不可忽視的問(wèn)題。肝臟是代謝酒精和平衡脂質(zhì)代謝的核心器官。酒精代謝過(guò)程破壞脂質(zhì)代謝平衡使得肝內(nèi)脂肪酸氧化減少

2、，合成增多，導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)量沉積，引起脂質(zhì)毒性作用。肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰα(carnitinepalmitoyltransferaseⅠ，CPTⅠα)位于線粒體外膜，是調(diào)控長(zhǎng)鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行脂肪酸β氧化的限速酶。實(shí)驗(yàn)表明CPTⅠα表達(dá)及活性受脂聯(lián)素(Adiponectin，Adipo)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase，AMPK)、沉默信號(hào)調(diào)控因子

3、1(Silent InformationRegulator1，SIRT1)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisomeproliferator-activated receptorα，PPARα)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(Sterolregulatory element binding proteins，SREBP)等影響。我們前期研究結(jié)果顯示上游調(diào)控因子AMPK、SIRT1、Adipo等隨酒精造模時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減少。本研究旨

4、在探討，隨造模時(shí)間延長(zhǎng)肝組織中下游調(diào)控因子CPTⅠα表達(dá)水平及其活性的變化。
　　方法:以50只雄性Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，應(yīng)用酒精灌胃方法制備酒精性肝病模型，于第4W時(shí)處死10只、8W時(shí)處死9只、12W處死8只、16W時(shí)處死8只大鼠，留取肝組織，并設(shè)置0W大鼠為對(duì)照組。組織病理學(xué)觀察肝組織脂肪變及炎癥損傷和CPTⅠα表達(dá)情況。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real Time-quantitative Polymerase Cha

5、in Reaction, RT-qPCR)法檢測(cè)CPTⅠα的mRNA表達(dá)水平。應(yīng)用蛋白印記(Western-Blot，WB)法檢測(cè)CPTⅠα的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、肝臟組織病理學(xué)改變
　　免疫組化方法示，CPTⅠα在酒精性肝病模型中隨著喂養(yǎng)周數(shù)的增加其表達(dá)越來(lái)越少(Fig.1-5)，肝組織脂肪變性逐漸加重。
　　2、CPTⅠα基因水平和蛋白水平均隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低。
　　3、隨著酒精喂

6、養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CPTⅠα mRNA表達(dá)水平逐漸降低。0W與4W相比表達(dá)下降(2.10±0.72 VS1.80±0.63)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。8W與12W相比CPTⅠα表達(dá)下降(1.72±0.65 VS1.13±0.68)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。8W與16W相比CPTⅠα表達(dá)明顯下降(1.72±0.65 VS0.83±0.67)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4、隨著酒精喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CPTⅠ

7、α蛋白水平下降，0W與4W相比表達(dá)下降(1.16±0.08 VS0.94±0.06)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。8W與12W相比CPTⅠα表達(dá)下降(0.78±0.06 VS0.69±0.07)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。8W與16W相比CPTⅠα表達(dá)明顯下降(0.78±0.06 VS0.38±0.02)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、酒精喂養(yǎng)可成功制備酒精性脂肪性肝損傷大鼠模型。